| 羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及反应原性分析 |
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| 引用本文： | 石正旺,刘华南,胡永浩,郑海学.羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及反应原性分析[J].甘肃农业大学学报,2016(6). |
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| 作者姓名： | 石正旺 刘华南 胡永浩 郑海学 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃 兰州 730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730046;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730046;3. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃 兰州,730070 |
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| 基金项目： | 国家"863"计划项目(2011AA10A211-1),国际原子能机构项目(16025/R),国家自然科学基金项目(31500617) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆和表达羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因,进而纯化并分析其反应原性.【方法】根据GenBank已发表的ORFV(GQ328006)的B2L基因序列设计一对特异引物,以提取阳性临床样品的总DNA为模板,通过PCR方法获得ORFV的B2L基因,将该基因片段连接至原核表达载体pET-30a(+)上,获得重组质粒pET-30a(+)-B2L.将此重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,挑取单克隆进行扩大培养,经IPTG诱导获得重组融合蛋白.用SDS-PAGE和Western-blotting对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-30a(+)-B2L,读码框正确.获得了43ku的表达产物,与预期目的蛋白大小相符;纯化后的目的蛋白能与ORFV阳性血清发生特异反应.【结论】成功对ORFV-B2L蛋白进行了原核表达,且纯化后蛋白具有良好的反应原性.
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| 关 键 词： | 羊口疮病毒 B2L基因 原核表达 纯化 反应原性分析 |
Prokaryotic expression,purification and reactogenicity of ORFV B2L gene |
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