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| 猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达 | |
| 引用本文： | 吴丹,童光志,仇华吉,薛强,周艳君,李景鹏.猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达[J].中国农业科学,2003,36(11):1352-1356. |
| 作者姓名： | 吴丹 童光志 仇华吉 薛强 周艳君 李景鹏 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001;东北农业大学生物工程系,哈尔滨,150030 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,150001 3. 东北农业大学生物工程系,哈尔滨,150030 |
| 摘 要： | 根据猪细小病毒 (porcineparvovirus ,PPV)NADL 2株非结构蛋白基因NS1序列设计引物 ,扩增出了PPVSY 99株的NS1基因 ,将其克隆到原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组质粒SYNS1/pET2 8a。将SYNS1/pET2 8a转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导 ,使PPVNS1基因获得了表达 ,运用ELISA和Westernblotting证实了表达产物的特异性。经表达产物细胞定位分析 ,表达的NS1蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变诱导时间或诱导剂IPTG的浓度 ,确定了表达NS1蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 .6mmol·L-1,诱导时间为 3h ,在大肠杆菌中最高表达含量为 17.8%。亲和层析后 ,得到了纯化的NS1蛋白 ,在Westernblotting检测中 ,纯化蛋白大大降低了反应背景。表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂来检测PPV的发生 ,而且还可用于鉴别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪 |
| 关 键 词： | 猪细小病毒 NS1 |
Molecular Cloning and Prokaryotic Expression of Non-structural Protein NS1 Gene of Porcine Parvovirus |
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| Abstract: | |
| Keywords: | NULL |
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