| 应用抑制性差减杂交技术构建副猪嗜血杆菌基因组差减文库 |
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| 引用本文： | 李森,李春玲,宋帅,杨冬霞.应用抑制性差减杂交技术构建副猪嗜血杆菌基因组差减文库[J].广东农业科学,2011,38(13). |
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| 作者姓名： | 李森 李春玲 宋帅 杨冬霞 |
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| 作者单位： | 广东省农科院兽K研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室,广东,广州,510640 |
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| 基金项目： | 广东省农业科技重大专项(2009A020101006); 广州市农业科技重大专项(2009A1-E041) |
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| 摘 要： | 为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)分析SW124和H465菌株细菌基因组的表达差异,并进行两轮差减杂交和两次PCR扩增,将第2次PCR产物与pMD19-T载体相连,转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞并进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR鉴定差异表达文库。结果共获得327个阳性克隆,筛选100个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2 000 bp大小的片段。差异DNA差减文库的构建为进一步筛选、克隆HPS特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。
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| 关 键 词： | 副猪嗜血杆菌 抑制性差减杂交 差异基因文库 |
Construction of a subtracted DNA library by suppression subtracted hybridization for differentially expressed genes in Haemophilus parasuis |
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| LI Miao,LI Chun-ling,SONG Shuai,YANG Dong-xia.Construction of a subtracted DNA library by suppression subtracted hybridization for differentially expressed genes in Haemophilus parasuis[J].Guangdong Agricultural Sciences,2011,38(13). |
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| Authors: | LI Miao LI Chun-ling SONG Shuai YANG Dong-xia |
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| Institution: | LI Miao,LI Chun-ling,SONG Shuai,YANG Dong-xia(Institute of Veterinary Medicine,Guangdong Academy of Agricultural Sciences/Guangdong Open Laboratory of Veterinary Public Health,Guangzhou 510640,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Haemophilus parasuis suppression subtractive hybridization(SSH) subtractive gene library |
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