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| 带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究 | |
| 引用本文： | 彭金美,王瑜,田志军,周艳君,陈瑾,安同庆,童光志.带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究[J].中国预防兽医学报,2009,31(1). |
| 作者姓名： | 彭金美 王瑜 田志军 周艳君 陈瑾 安同庆 童光志 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;华中农业大学,湖北,武汉,430070 3. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院,上海兽医研究所,上海,200232 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家科技支撑计划，国家重点基础研究发展规划(973计划) |
| 摘 要： | 本研究通过基因克隆技术以伪狂犬病病毒(PRV)弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源重组序列,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记,构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII.将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC.通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒Bartha K61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度.重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,其绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传.本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础. |
| 关 键 词： | 伪狂犬病毒 Bartha K61株 重组病毒 |
Construction of a recombinant pseudorabies virus with BAC plasmid insertion in the TK gene |
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| PENG Jin-mei,WANG Yu,TIAN Zhi-jun,ZHOU Yan-jun,CHEN Jin,AN Tong-qing,TONG Guang-zhi.Construction of a recombinant pseudorabies virus with BAC plasmid insertion in the TK gene[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2009,31(1). | |
| Authors: | PENG Jin-mei WANG Yu TIAN Zhi-jun ZHOU Yan-jun CHEN Jin AN Tong-qing TONG Guang-zhi |
| Abstract: | |
| Keywords: | BAC |
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