| 牛FADD基因的克隆分析及其真核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 杨润军,张路培,许尚忠.牛FADD基因的克隆分析及其真核表达载体的构建[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(2):15-20. |
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| 作者姓名： | 杨润军 张路培 许尚忠 |
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| 作者单位： | 杨润军,许尚忠,YANG Run-jun,XU Shang-zhong(西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所,北京,100094);张路培,李俊雅,高雪,ZHANG Lu-pei,LI Jun-ya,GAO Xue(中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所,北京,100094)
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家科技攻关计划后继项目 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆牛FADD基因并构建真核表达载体,以探讨其在牛卵泡发育过程中的调控作用。【方法】采用RT-PCR技术,从牛卵巢组织总RNA中反转录FADD cDNA,对编码区核苷酸序列分析后,将其全长cDNA删除终止密码子,采用定向克隆技术连接克隆到含有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-Nl中,用BglⅡ、EcoRⅠ双酶切、测序进行鉴定,并进行了牛FADD mRNA的组织表达谱分析。【结果】克隆的牛FADD基因编码区全长序列与NCBI公布的序列完全一致,核苷酸和氨基酸序列与猪的同源性最高,与鸡的同源性最低,仅为42.5%和44%;通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体。组织表达谱分析表明,牛FADD mRNA高表达于肝脏、淋巴组织及睾丸、卵巢组织,在小肠、心、胰腺、肺、肾及肌肉中则弱表达或无表达。【结论】成功克隆了牛FADD基因,并构建pAcGFP-N1-bFADD融合蛋白表达载体,为FADD基因在牛卵母细胞发育调控中的基础研究提供了一种简便可靠的方法。
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| 关 键 词： | FADD基因 pAcGFP-Nl载体 融合蛋白 重组质粒 |
| 收稿时间： | 4/2/2008 12:00:00 AM |
Cloning and analysis of the cattle FADD gene and construcion of eukaryotic expression vector |
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| YANG Run-jun,ZHANG Lu-pei,XU Shang-zhong,LI Jun-ya,GAO Xue.Cloning and analysis of the cattle FADD gene and construcion of eukaryotic expression vector[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2009,37(2):15-20. |
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| Authors: | YANG Run-jun ZHANG Lu-pei XU Shang-zhong LI Jun-ya GAO Xue |
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| Institution: | 1 College of Animal Science and Technology,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China;2 Institute of Animal Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100094,China) |
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| Abstract: | |
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