| 绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达 |
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| 引用本文： | 贺三刚,张 宁,张雪梅,刘明军,李文蓉.绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达[J].西北农业学报,2012,21(11):1-7. |
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| 作者姓名： | 贺三刚 张 宁 张雪梅 刘明军 李文蓉 |
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| 作者单位： | 新疆畜牧科学院生物技术研究中心农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室新疆维吾尔自治区动物生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种科技培育重大专项(2009ZX08008-002B) |
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| 摘 要： | 根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95%以上。SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60ku,与预期蛋白大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白。说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。
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| 关 键 词： | 绵羊 Noggin基因 序列分析 原核表达 |
Molecular Cloning, Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of Noggin Gene in Sheep |
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| HE Sangang,ZHANG Ning,ZHANG Xuemei,LIU Mingjun and LI Wenrong.Molecular Cloning, Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of Noggin Gene in Sheep[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2012,21(11):1-7. |
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| Authors: | HE Sangang ZHANG Ning ZHANG Xuemei LIU Mingjun and LI Wenrong |
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| Institution: | (The Key Lab of Livestock Reproduction & Breed Biotechnology of Ministry of Agriculture,The Key Lab of Animal Biotechnology of Xinjiang,Xinjiang Academy of Biotechnological Center,Urumqi 830000,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sheep Noggin gene Sequence analysis Prokaryotic expression |
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