| 非洲猪瘟病毒UBCv1的原核表达及多抗制备 |
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| 引用本文： | 蒋思文,房立春,冯泽新,焦鹏,王玥超,梁艳,史东宇,陈青.非洲猪瘟病毒UBCv1的原核表达及多抗制备[J].北京农学院学报,2021,36(4):1-6. |
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| 作者姓名： | 蒋思文 房立春 冯泽新 焦鹏 王玥超 梁艳 史东宇 陈青 |
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| 作者单位： | 北京农学院生物与资源环境学院/农业农村部华北都市农业重点实验室,北京102206;山东省农业科学院,济南250100 |
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| 摘 要： | 目的]为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)泛素结合酶(UBCv1)的生物学功能及致病机制奠定基础.方法]以p3XFLAG-CMV-7.1-I215L质粒为模板,利用PCR方法扩增非洲猪瘟病毒I215L基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a,构建pET-28a-I215L重组质粒,并将其转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白.重组蛋白经His柱层析纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性.结果]成功构建了重组质粒pET-28a-I215L,重组菌经IPTG诱导后能够可溶性表达重组蛋白,产物约28 kDa,与预测大小一致.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶7290000;Western blot结果显示抗体具有较好的特异性.结论]成功表达纯化了ASFV的泛素结合酶并制备其多克隆抗体,为后期解析ASFV泛素结合酶的结构、功能及病毒相关致病机制提供了重要的生物材料.
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 泛素结合酶 原核表达 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of ubiquitin-conjugating enzyme from African swine fever virus |
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| JIANG Siwen,FANG Lichun,FENG Zexin,JIAO Peng,WANG Yuechao,LIANG Yan,SHI Dongyu,CHEN Qing.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of ubiquitin-conjugating enzyme from African swine fever virus[J].Journal of Beijing Agricultural College,2021,36(4):1-6. |
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| Authors: | JIANG Siwen FANG Lichun FENG Zexin JIAO Peng WANG Yuechao LIANG Yan SHI Dongyu CHEN Qing |
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