| 禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定 |
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| 引用本文： | 孟庆文,邓国华,曹素芳,乔传玲,于康震,田国斌,唐秀英.禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定[J].中国预防兽医学报,2000(Z1). |
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| 作者姓名： | 孟庆文 邓国华 曹素芳 乔传玲 于康震 田国斌 唐秀英 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室!哈尔滨150001，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室!哈尔滨150001，新疆农业大学，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室!哈尔滨150001，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽 |
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| 基金项目： | “973”项目资助!（G1999011902，G1999011905） |
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| 摘 要： | 根据反义ＲＮＡ作用原理，以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５ ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因，反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中，命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ，用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选抗性克性，扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ），以巢式ＰＣＲ方法检测，以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３，表明已筛选出产毒的的克隆细胞质，得到重组逆转录病毒，为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。
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| 关 键 词： | 反义RNA 禽流感病毒 逆转录病毒载体 巢式PCR |
Construction of NP Gene Retrovirus Vector for Avine Influenza Virus and Identification of Recombinant |
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| MENG Qingwen,DENG Guohua,CAO Sufang,QIAO Chuanling,YU Kangzhen,TIAN Guobin,TANG Xiuying.Construction of NP Gene Retrovirus Vector for Avine Influenza Virus and Identification of Recombinant[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2000(Z1). |
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| Authors: | MENG Qingwen DENG Guohua CAO Sufang QIAO Chuanling YU Kangzhen TIAN Guobin TANG Xiuying |
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| Abstract: | According to the theory of antisense RNA,we inserted full-long the cDNA of NP gene and 5' and 235bp of AIV H14N5 into retroviral vector pLXSN, named pLXas-NP and pLXas-5 '-NP respectively. The retroviral plasmid were transfected into packaging cell line PA317 with lipofectin, then by G418 colony screening method. Firstly the virus RNAs(vRNA)were extracted from the virus-containing super- natant of packaging cell lines, detected the vRNA by Nested-PCR. Secondly infect NIH3T3 with the virus-containing supernatant. Screened the high-titer clones.The recombinant retroviruses were obtained.The way is a rapidly and simply preparation for latter research. |
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| Keywords: | Antisense RNA Avian influenza virus Retrovirus Retrovirus vector Nested PCRl |
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