| TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究 |
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| 引用本文： | 敖叶,陈祥,周志楠,骆金红,韦仕南,张艳,惠茂茂,吴雨,杨沛方.TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究[J].畜牧兽医学报,2020,51(11):2699-2709. |
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| 作者姓名： | 敖叶 陈祥 周志楠 骆金红 韦仕南 张艳 惠茂茂 吴雨 杨沛方 |
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| 作者单位： | 1. 贵州大学 高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室, 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室, 贵阳 550025;2. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;3. 贵州省草业研究所, 贵阳 550006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31760652）；国家重点研发计划项目（2017YFD0501900）；贵州省优秀青年科技人才项目（[2017]5624） |
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| 摘 要： | 旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证，并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制。本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象。通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平；构建目的基因真核表达载体。培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞，并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞，检测培养基中雌二醇（E2）、孕酮（P4）的浓度。利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。随后，利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响。RT-qPCR结果表明，TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达，且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组；免疫荧光法证实，所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞；TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后，在极显著提高TGFβ2与PPP3CA基因表达的同时，能够极显著地抑制卵巢颗粒细胞中FSHR、GnRHR、BMP4、TIMP3基因的表达（P<0.01）。细胞增殖与凋亡结果显示，TGFβ2与PPP3CA基因能够促进颗粒细胞凋亡，抑制其增殖。酶联免疫吸附试验结果表明，TGFβ2与PPP3CA基因能够显著促进E2的分泌，但对P4的分泌无显著影响。本研究成功构建了TGFβ2、PPP3CA基因真核表达载体，荧光定量结果表明，超表达TGFβ2、PPP3CA基因抑制了繁殖相关基因的表达，提示TGFβ2、PPP3CA基因对山羊繁殖相关基因表达有一定的影响。为进一步研究TGFβ2、PPP3CA基因对黔北麻羊繁殖力的影响提供基础数据。
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| 关 键 词： | 黔北麻羊 TGFβ2基因 PPP3CA基因 卵巢颗粒细胞 差异表达 |
| 收稿时间： | 2020-05-06 |
Expression of TGFβ2 and PPP3CA Genes in Gonadal Axis of Qianbei Ma Goat and Their Regulation on Ovarian Granulosa Cells |
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| AO Ye,CHEN Xiang,ZHOU Zhinan,LUO Jinhong,WEI Shinan,ZHANG Yan,HUI Maomao,WU Yu,YANG Peifang.Expression of TGFβ2 and PPP3CA Genes in Gonadal Axis of Qianbei Ma Goat and Their Regulation on Ovarian Granulosa Cells[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2020,51(11):2699-2709. |
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| Authors: | AO Ye CHEN Xiang ZHOU Zhinan LUO Jinhong WEI Shinan ZHANG Yan HUI Maomao WU Yu YANG Peifang |
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| Institution: | 1. Guizhou Key Laboratory of Animal Genetics, Breeding and Reproduction, Key Laboratory of Plateau Mountain Animal Genetics, Breeding and Reproduction of Ministry of Education, Guizhou University, Guiyang 550025, China;2. College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China;3. Guizhou Province Grass Industry Research Institute, Guiyang 550006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Qianbei Ma goats TGFβ2 gene PPP3CA gene ovarian granulosa cells differential expression |
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