| 东南石栎ISSR-PCR反应体系的优化 |
| |
| 引用本文： | 刘丽丽,金则新,李建辉,李钧敏.东南石栎ISSR-PCR反应体系的优化[J].西北林学院学报,2008,23(5). |
| |
| 作者姓名： | 刘丽丽 金则新 李建辉 李钧敏 |
| |
| 作者单位： | 1. 北京林业大学,自然保护区学院,北京,100083;台州学院,生态研究所,浙江,临海,317000
2. 台州学院,生态研究所,浙江,临海,317000 |
| |
| 基金项目： | 浙江省自然科学基金，浙江省科研计划 |
| |
| 摘 要： | 为了利用ISSR分子标记进行东南石栎(Lithocarpus harlandii)种群遗传多样性分析,获得重复性和可靠性较高的ISSR带谱,有必要对其影响因素进行优化.以东南石栎基因组DNA为研究对象,测试东南石栎ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,对影响PCR扩增效果的一些因素,如Mg2 浓度、4×dNTP浓度、模板DNA用量、引物用量、BSA浓度、Taq DNA聚合酶用量等6个因素进行筛选和优化,最终确立了可用于东南石栎ISSR-PCR分析的最适宜的PCR反应条件:10μL PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol·L-1Tris-HCl,pH值8.8,100mmol·L-1 KCl,1%Triton X-100),0.5U Taq DNA聚合酶,2.25 mmol·L-1MgCl2,0.5 mmol·L-1 4×dNTP,6pmol引物,2 mg·mL-1BSA,10 ng模板DNA.在此最适条件下,比较了降落PCR的扩增结果与最适退火温度条件下的PCR扩增结果的差异,确定了最适的ISSR扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,57℃退火1 min(每个循环降低0.5℃),72℃延伸1.5 min,共10个循环;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,共25个循环;72℃延伸5 min.以此条件采用12个引物对千岛湖的东南石栎居群进行扩增,共扩增出174个DNA片段,多态位点百分率为81.61%,种群内遗传多样性处于较高水平.
|
| 关 键 词： | 东南石栎 优化 遗传多样性 |
Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Lithocarpus harlandii |
| |
| LIU Li-li,JIN Ze-xin,LI Jian-hui,LI Jun-min.Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Lithocarpus harlandii[J].Journal of Northwest Forestry University,2008,23(5). |
| |
| Authors: | LIU Li-li JIN Ze-xin LI Jian-hui LI Jun-min |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | ISSR |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
