| 美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化 |
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| 引用本文： | 李娜,李恩杰,王青华,王玉珠,张永安,段立清.美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化[J].林业科学研究,2018,31(5):57-63. |
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| 作者姓名： | 李娜 李恩杰 王青华 王玉珠 张永安 段立清 |
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| 作者单位： | 内蒙古农业大学林学院;中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 |
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| 基金项目： | 国家林业公益性行业科研专项"重大森林害虫持续防控关键技术与体系研究"（201504302） |
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| 摘 要： | 目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。
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| 关 键 词： | 美国白蛾核型多角体病毒 ORF72 载体构建 诱导表达 纯化 |
| 收稿时间： | 2017/10/24 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/1/15 0:00:00 |
Construction, Expression and Purification of Prokaryotic Expression Vector of Hyphantria cunea Nuclear Polyhedrosis Virus ORF72 |
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| LI N,LI En-jie,WANG Qing-hu,WANG Yu-zhu,ZHANG Yong-an and DUAN Li-qing.Construction, Expression and Purification of Prokaryotic Expression Vector of Hyphantria cunea Nuclear Polyhedrosis Virus ORF72[J].Forest Research,2018,31(5):57-63. |
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| Authors: | LI N LI En-jie WANG Qing-hu WANG Yu-zhu ZHANG Yong-an and DUAN Li-qing |
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| Institution: | Forestry College, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010019, Inner Mongolia, China,Research Institute of Forest Ecology, Environment and Protection, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China,Research Institute of Forest Ecology, Environment and Protection, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China,Research Institute of Forest Ecology, Environment and Protection, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China,Research Institute of Forest Ecology, Environment and Protection, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China and Forestry College, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010019, Inner Mongolia, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus ORF72 vector construction induced expression purification |
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