| 瞬时过表达ThCBL4基因提高刚毛柽柳耐盐能力 |
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| 引用本文： | 邹全程,唐绯绯,刘中原,高彩球.瞬时过表达ThCBL4基因提高刚毛柽柳耐盐能力[J].林业科学研究,2018,31(3):60-67. |
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| 作者姓名： | 邹全程 唐绯绯 刘中原 高彩球 |
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| 作者单位： | 东北林业大学林学院;国家林业局调查规划设计院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31370676） |
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| 摘 要： | 目的]本研究拟从刚毛柽柳(Tamarix hispida)中克隆获得1个ThCBL4基因,研究该基因的耐盐功能。方法]以"Calcineurin B-like protein"作为关键词,对实验室前期构建的刚毛柽柳转录组序列进行比对查找获得ThCBL4基因c DNA序列,并通过RT-PCR和测序验证克隆获得的ThCBL4基因序列。利用生物信息学工具进行序列分析。利用Real time RT-PCR分析了0.4 mol·L-1NaCl、20%(w/v)PEG6000和100μmol·L-1ABA胁迫处理后ThCBL4基因在刚毛柽柳根和叶中的表达情况。为了进一步分析ThCBL4基因的耐盐功能,构建了植物过表达载体pROKⅡ-ThCBL4,抑制表达载体p FGC5941-ThCBL4,并进行柽柳瞬时转化,同时以pROKII瞬时侵染柽柳作为对照。分析比较NaCl胁迫后瞬时转化柽柳POD、SOD酶活性、MDA含量和DAB、NBT及Evans blue染色情况,以综合评定ThCBL4基因的耐盐功能。结果]ThCBL4基因c DNA长度为1 432 bp,编码区长度675 bp,编码224个氨基酸,编码蛋白分子量为25.57 k Da,理论等电点为5.0。3种不同环境处理后,ThCBL4基因在刚毛柽柳根中均为上调表达,在刚毛柽柳叶中均为下调表达。对盐胁迫后瞬时表达柽柳ThCBL4基因的表达分析显示,成功获得瞬时过表达(标记为OE)、抑制表达(标记为RNAi)转基因株系。进一步的生理指标和生理染色结果显示,盐胁迫下过表达ThCBL4植株的保护酶类SOD与POD活性明显高于对照和抑制表达株系。NBT和DAB染色结果显示,过表达植株的O·-2和H_2O_2含量明显低于对照,抑制表达植株的O·-2和H_2O_2含量明显高于对照;而Evans blue染色和MDA含量测定结果显示,与对照相比,过表达ThCBL4植株着色更浅、MDA含量更低,而抑制表达ThCBL4植株着色更深、MDA含量更高。结论]ThCBL4基因可能参与了刚毛柽柳的耐盐胁迫应答,瞬时过表达ThCBL4基因通过提高植株的保护酶活性,降低活性氧氧化程度和细胞损伤的程度,从而提高了转基因刚毛柽柳的耐盐能力。
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| 关 键 词： | 刚毛柽柳 ThCBL4基因 耐盐 瞬时表达 |
| 收稿时间： | 2017/3/23 0:00:00 |
A Novel Calcineurin B-like Proteins Gene (ThCBL4) Improving the Salt Tolerance in Transient Overexpression Tamarix hispida |
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| ZOU Quan-cheng,TANG Fei-fei,LIU Zhong-yuan and GAO Cai-qiu.A Novel Calcineurin B-like Proteins Gene (ThCBL4) Improving the Salt Tolerance in Transient Overexpression Tamarix hispida[J].Forest Research,2018,31(3):60-67. |
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| Authors: | ZOU Quan-cheng TANG Fei-fei LIU Zhong-yuan and GAO Cai-qiu |
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| Institution: | School of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, Heilongjiang, China;Survey & Planning Institute of State Forestry Administration, Beijing 100714, China,School of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, Heilongjiang, China,School of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, Heilongjiang, China and School of Forestry, Northeast Forestry University, Harbin 150040, Heilongjiang, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tamarix hispida ThCBL4 gene gene expression salt tolerance |
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