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| 含不同个数基序肽聚糖锚钩蛋白与纳米抗体融合表达对GEM颗粒结合活性的比较 | |
| 作者单位： | ;1.南京农业大学动物医学院;2.国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
| 摘 要： | 比较3种含不同个数基序肽聚糖锚钩蛋白(protein anchor,PA)的结合活性。首先应用PCR技术分别扩增得到含有1个、2个和3个自溶素基序(Lysin Motif,Lys M)基因片段的PA、PA2与PA3;然后应用含纳米抗体(nanobody,Nb)基因的重组质粒p ET-28a(+)-Nb构建原核表达载体,将其转化大肠杆菌BL-21(DE3),进行诱导表达,获得目的蛋白;最后将可溶性的PA-Nb、PA2-Nb、PA3-Nb融合蛋白与GEM(Gram-positive enhancer matrix)颗粒结合,经Western blot与SDS-PAGE进行结合鉴定与结合活性比较分析。试验结果显示裂解后可溶性的融合蛋白PA-Nb、PA2-Nb、PA3-Nb都能与GEM颗粒结合,PA2-Nb与GEM颗粒的结合活性明显好于PA-Nb,PA2-Nb的表达量和可溶性明显优于PA3-Nb,PA2-Nb与GEM颗粒的结合活性与PA3-Nb相当。本研究可为进一步完善乳球菌外壳-蛋白锚钩展示系统提供理论依据。 |
| 关 键 词： | 乳酸乳球菌 锚钩蛋白 原核表达 GEM颗粒 结合活性 |
Comparison of the binding activity of the fusion protein of nanobody and peptidoglycan protein anchor with different numbers of motifs to GEM particles |
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