| SV40LT抗原介导的蝙蝠胎儿肾细胞永生化 |
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| 引用本文： | 张思春,杨凡力,余乐,何彪,涂长春.SV40LT抗原介导的蝙蝠胎儿肾细胞永生化[J].中国预防兽医学报,2014(5):363-366. |
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| 作者姓名： | 张思春 杨凡力 余乐 何彪 涂长春 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院军事兽医研究所 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室 |
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| 基金项目： | NSFC-与云南联合基金(U1036601);国家“973”项目(2012CB722501);国家“863”项目(2012AA022006) |
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| 摘 要： | 蝙蝠是许多新发人兽共患病病毒的自然储存宿主,由于缺乏蝙蝠细胞系,只能利用其他哺乳动物细胞系来分离蝙蝠病毒,因此成功分离的几率较低。为建立稳定的蝙蝠细胞系,本研究利用胰酶消化法培养东亚水鼠耳蝠(Myotis petax)的胎儿原代肾细胞。利用重组逆转录病毒转导法将SV40 LT抗原基因转导入蝙蝠胎儿原代肾细胞,经嘌呤霉素筛选获得LT基因整合和表达的阳性细胞,并进行连续传代培养。RT-PCR和western blot检测表明转导的细胞中有SV40 LT基因的整合和表达。转导细胞在软琼脂中培养不能够形成克隆,表明其未发生癌性转化。对第33代的转导细胞进行单细胞克隆,获得了3个衍生的细胞系,其中Mp-Ki03细胞系已培养至第60代。病毒感染试验表明蝙蝠西江病毒和蝙蝠轮状病毒均可以感染该转导细胞系。本研究通过SV40 LT抗原建立了永生化的蝙蝠胎儿肾细胞系,并且该细胞系对蝙蝠病毒易感,对分离与鉴定蝙蝠病毒以及研究病毒感染蝙蝠细胞的机制具有重要的作用。
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| 关 键 词： | 蝙蝠 肾细胞 SV40 LT抗原 永生化 |
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