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| SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用 | |
| 引用本文： | 王金良,郭显坡,魏凤,沈志强.SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用[J].中国兽医学报,2010,30(10). |
| 作者姓名： | 王金良 郭显坡 魏凤 沈志强 |
| 作者单位： | 1. 中国农业大学,动物医学院,北京,100094;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东,滨州,256600 2. 山东绿都生物科技有限公司,山东,滨州,256600 3. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东,滨州,256600 4. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东,滨州,256600;山东绿都生物科技有限公司,山东,滨州,256600 |
| 摘 要： | 根据GenBank登录的猪流行性腹泻病毒株FJ473395的M基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出182 bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物Tm在85～85.5℃之间,灵敏度为5.875拷贝/μL,特异性和重复性较好。本试验建立了检测PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断,并定量分析PEDV感染程度奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR |
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