摘 要: | 建立了检测动物源性食品中猪、牛成分的PCR结合变性高效液相色谱技术,为牛、羊成分的鉴别提供一种新的分子诊断技术。以猪、牛的线粒体DNA为靶基因,设计特异性PCR引物。双重PCR扩增后,DHPLC分析。经优化DHPLC最佳条件为:使用PS-DVBC18 DNASep色谱柱(4.6 mm×50 mm,粒度3μm),设定50℃柱温,起始流动相为:45%缓冲液A和55%缓冲液B,流速0.9 m L/min;上样量:PCR产物5μL。结果表明:DHPLC法具有良好的特异性,仅能检出猪、牛源成分,而与羊、鸡、鸭源成分无交叉反应;方法的灵敏度可以达到1 000 copies核酸。
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