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| 籽粒苋AmA1基因的克隆、原核表达及植物表达载体构建 | |
| 引用本文： | 许明,严其煌,黄志伟,程祖锌,杨志坚,郑祥正,郑金贵.籽粒苋AmA1基因的克隆、原核表达及植物表达载体构建[J].分子植物育种,2009,7(4):793-800. |
| 作者姓名： | 许明 严其煌 黄志伟 程祖锌 杨志坚 郑祥正 郑金贵 |
| 作者单位： | 1. 农业部海峡两岸农业技术合作中心,福州,350002;福建农林大学农产品品质研究所,福州,350002;福建农林大学作物科学学院,福州,350002 2. 农业部海峡两岸农业技术合作中心,福州,350002;福建农林大学农产品品质研究所,福州,350002 3. 福建农林大学农产品品质研究所,福州,350002 |
| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项，福建省科技创新平台建设项目，福建省科技厅重大专项专题项目 |
| 摘 要： | 本文采用RT-PCR方法,从籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)"千穗谷1号"的幼嫩种子克隆出AmA1基因的完整开放阅读框序列(ORF),其长度为915 bp,编码305个氨基酸.经Blast同源性分析,结果表明该序列与GenBank登录的籽粒苋AmA1基因的核苷酸序列基本一致,只在起始密码子下游51 bp处由G变成C,但不影响氨基酸的编码.将该基因插入原核表达载体pET28a(+),并转化到大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导,能正确表达出37 kD的融合蛋白.同时构建了AmA1基因双T-DNA双标记植物表达载体PCDMAR-AmA1-dsRed2-hpt,该载体含有2个独立的T-DNA区,其中一个T-DNA区含有选择标记基因hpt和可视标记基因DsRed2(红色荧光蛋白基因),另一个T-DNA区含有由水稻胚乳特异性表达启动子pGt1驱动的AmA1基因,在AmA1基因的两侧连有两段正向重复的烟草Rb7MARs,以增强AmA1基因的表达.实验结果为下一步规模化培育稻米氨基酸组成平衡无选择标记的转基因水稻奠定了基础. |
| 关 键 词： | 籽粒苋 基因克隆 原核表达 载体构建 |
Cloning, Prokaryotic Expression and Plant Expression Vector Construction of AmA1 Gene from A maranthus hypochondriacus |
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| Xu Ming,Yan Qihuang,Huang Zhiwei,Cheng Zuxin,Yang Zhijian,Zheng Xiangzheng,Zheng Jingui.Cloning, Prokaryotic Expression and Plant Expression Vector Construction of AmA1 Gene from A maranthus hypochondriacus[J].Molecular Plant Breeding,2009,7(4):793-800. | |
| Authors: | Xu Ming Yan Qihuang Huang Zhiwei Cheng Zuxin Yang Zhijian Zheng Xiangzheng Zheng Jingui |
| Institution: | Xu Ming 1,2,3 Yan Qihuang 1,2 Huang Zhiwei 1,2 Cheng Zuxin 1,3 Yang Zhijian 1,2 Zheng Xiangzheng 2 Zheng Jingui 1,3 1 Cross-Strait Agricultural Technology Cooperation Center,Ministry of Agriculture,Fuzhou,350002,2 Agricultural Product Quality Institute,Fujian Agriculture , Forestry University,3 College of Crop Sciences |
| Abstract: | The whole open reading fragment (ORF) of gene encodind protein with well-balanced amino acid composition was cloned from Amaranthus hypochondriacus"Qiansuigu No.1"using RT-PCR. The length of AmA1 gene is 915 bp, which encoding a peptide with 305 amino acid residues. The homology analysis results showed that AmA1 gene share high similarity with Amaranthus hypochondriacus AmA1 protein gene which had been registered in GenBank.Comparing to original AmA1 gene, the base of AmA1 gene change from G to C at 51 bp d... |
| Keywords: | AmA1 |
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