| H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达 |
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| 引用本文： | 李茜,刘新文,刘水清,高轩,李明义.H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达[J].上海畜牧兽医通讯,2007(2):26-28. |
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| 作者姓名： | 李茜 刘新文 刘水清 高轩 李明义 |
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| 作者单位： | 1. 河北农业大学动物科技学院,河北,保定,071000
2. 青岛易邦生物工程,有限公司,山东,青岛,266032
3. 内蒙古农业大学,内蒙古,呼和浩特,010018 |
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| 摘 要： | 根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列设计合成了一对引物AI-N1/AI-N2,利用RT-PCR方法扩增AIVNS1基因并克隆到pMD18-T载体上,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,与GenBank中收录的其他分离株NS1基因进行序列比较分析,同源性达96%~99%,含有NS1基因的1个开放性阅读框(ORF)。将该基因克隆到pET-28a中构建NS1基因原核表达质粒pET/NS1,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达,所表达的蛋白质分子质量约为30kD。Western-blotting结果表明表达的NS1蛋白有良好的生物学活性,与H5N1 AIV感染鸡血清发生特异性反应,而与H5N1 AIV灭活疫苗免疫鸡血清无反应,为建立区分野毒AIV感染家禽与AIV灭活疫苗免疫家禽ELISA方法的建立提供了生物学材料。
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| 关 键 词： | 禽流感病毒 非结构蛋白 基因克隆与分析 基因表达 |
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