| RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB |
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| 引用本文： | 唐志如,张友明,孙志洪,黄瑞林,印遇龙.RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB[J].广西农业生物科学,2009(3):417-421. |
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| 作者姓名： | 唐志如 张友明 孙志洪 黄瑞林 印遇龙 |
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| 作者单位： | 中国科学院亚热带农业生态研究所; |
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| 基金项目： | 国家自然基金项目(30700581);;国家863项目(2008AA10Z316);;中国科学院亚热带农业生态研究所青年人才领域前沿项目(ISACX-LYQY-QN-0701);;中国科学院优秀博士学位论文和院长奖获得者科研启动专项资金(0723022110)资助 |
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| 摘 要： | RED同源重组法敲除发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB，为发光光状杆菌基因敲除提供方法。采用TOPO克隆方法将基因cipA和cipB克隆到质粒pTA上，获得质粒pTA-cipA和pTA-cipB；采用Red／ET方法分别将Gentd基因和Aprar基因分别插入pTA-cipA和pTA-cipB的cipa和cipB基因中，并替换cipA和cipB基因部分序列，获得pTA-Gentalncip A和pTA-ApralncipB；pTA-GentalncipA通过BamH I酶切，从0．7％琼脂糖胶上回收获得GentalncipA，将GemaIncipA导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescens subsp.Akhurstii中，通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipA；pTA—ApraIncipB用EcoR I酶切，从0．7％琼脂糖胶上回收获得ApraIncipB，将ApmIncipB导入带有质粒pASK-αβγA的P.luminescens subsp．Akhurstii中，通过的RED同源重组敲除发光光状杆菌晶体蛋白cipB；42℃下热激去除突变菌中的质粒pASK-αβγA。克隆PCR和SDS—PAGE电泳结果表明发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB均被敲除。采用RED同源重组法成功地敲除了发光光状杆菌晶体蛋白基因cipA和cipB。
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| 关 键 词： | 发光光状杆菌 RED同源重组 敲除 晶体蛋白 |
Knockout of the Crystalline Inclusion Protein Gene cipA and cipB in Photorhabdus luminescens by RED Homologous Recombination |
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| Tang Zhiru Zhang Youming Sun Zhihong Huang Ruilin Yin Yulong Institute of Subtropical Agriculture,Chinese Academy of Sciences,Changsha.Knockout of the Crystalline Inclusion Protein Gene cipA and cipB in Photorhabdus luminescens by RED Homologous Recombination[J].Journal of Guangxi Agricultural and Biological Science,2009(3):417-421. |
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| Authors: | Tang Zhiru Zhang Youming Sun Zhihong Huang Ruilin Yin Yulong Institute of Subtropical Agriculture Chinese Academy of Sciences Changsha |
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| Institution: | Tang Zhiru Zhang Youming Sun Zhihong Huang Ruilin Yin Yulong Institute of Subtropical Agriculture,Chinese Academy of Sciences,Changsha,410125 |
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| Abstract: | Study on the knockout of the crystalline inclusion protein gene cipA and cipB in Photorhabdus lumi-nescens subsp.Akhurstii by RED homologous recombination provide a gene knockout method for P.luminescens subsp.Akhurstii .pTA-cipA and pTA-cipB were acquired via cipA and cipB amplified from P.luminescens subsp.Akhurstii genome DNA and cloned on pTA by TOPO Cloning;pTA-GentarInCipA or pTA-AprarInCipB was gained via the gentamycine resistant gene(Gentar) or apramycin resistant gene(Aprar) with two homology arms... |
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| Keywords: | P luminescens subsp Akhurstii RED homologous recombination Knockout Crystalline protein |
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