| 小立碗藓C3H基因敲除载体的构建及C3H1-nptⅡ-C3H2目的片段最佳PCR条件筛选 |
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| 引用本文： | 崔彩云,晏国洪,姜山.小立碗藓C3H基因敲除载体的构建及C3H1-nptⅡ-C3H2目的片段最佳PCR条件筛选[J].北方园艺,2016(5):113-118. |
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| 作者姓名： | 崔彩云 晏国洪 姜山 |
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| 作者单位： | 贵州师范大学生命科学学院,贵州贵阳,550001;贵州师范大学生命科学学院,贵州贵阳,550001;贵州师范大学生命科学学院,贵州贵阳,550001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30860158)，贵州省自然科学基金资助项目(31260426). |
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| 摘 要： | 以小立碗藓作为试材,将总长为1 981bp的小立碗藓C3H基因分为上游片段(1 000bp),下游片段(981bp),并以此设计引物,得到上游臂(C3H1,735bp)、下游臂(C3H2,700bp)。在C3H1引物设计时引入XhoI、EcoRV酶切位点到两端,C3H2设计时引入NdeI、BamHI酶切位点到两端。以小立碗藓总DNA为模板,通过PCR扩增得到C3H1和C3H2片段。将C3H1和C3H2插入到pTN182载体中,获得敲除载体(C3H1-pTN182-C3H2质粒),通过PCR获得C3H1-nptⅡ?C3H2目的片段,并且采用单因素方法研究引物浓度与退火温度对PCR产物浓度及特异性的影响。结果表明:引物浓度为0.20μmol/L,退火温度为58.7℃,PCR产物特异性最高且产物浓度较高。
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| 关 键 词： | 小立碗藓C3H基因 基因敲除 载体构建 退火温度 |
The Construction of Physcomitrella patens C3H Gene Knock Out Vector and Optimum Condition of PCR for C3H1-nptⅡ-C3H2 Target Fragment |
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| CUI Caiyun,YAN Guohong,JIANG Shan.The Construction of Physcomitrella patens C3H Gene Knock Out Vector and Optimum Condition of PCR for C3H1-nptⅡ-C3H2 Target Fragment[J].Northern Horticulture,2016(5):113-118. |
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| Authors: | CUI Caiyun YAN Guohong JIANG Shan |
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