| 抗Luman募集因子N端单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 李 晓,兰向莉,徐晓彬.抗Luman募集因子N端单克隆抗体的制备及鉴定[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2012,40(12):1-7. |
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| 作者姓名： | 李 晓 兰向莉 徐晓彬 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室;西北农林科技大学 动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室;西北农林科技大学 动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 高等学校博士点学科专项科研基金项目(20110204120010) |
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| 摘 要： | 【目的】制备抗Luman募集因子N端(Luman-recruiting factor N terminal,LRF-N)蛋白的单克隆抗体。【方法】PCR扩增LRF-N端的194bp序列,构建LRF-N重组质粒pGEX-LRF-N,转染BL21(DE3)菌,诱导表达并纯化GST-LRF-N融合蛋白,以其作为抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,免疫4次,每次间隔10d,第4次加强免疫3d后采取小鼠脾脏,分离脾细胞,与SP2/0细胞融合,用ELISA和Western blot进行阳性细胞株的筛选和鉴定,对获得的杂交瘤细胞的细胞核型、分泌稳定性以及所分泌的单克隆抗体进行鉴定。【结果】pGEX-LRF-N在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,GST-LRF-N蛋白分子质量约为33ku,与预期结果一致。试验共获得3株稳定分泌抗LRF-N抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2AC9、2AG10和3G7。单抗2AC9、2AG10、3G7能够特异性地识别GST-LRF-N蛋白,亚型鉴定结果显示,其重链分别为IgG2a、IgM和IgG1。【结论】获得的抗LRF-N抗体的杂交瘤细胞株2AC9、2AG10、3G7单抗特异性良好,能够稳定分泌抗体,可用于小鼠LRF蛋白生物学功能及活性的进一步研究。
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| 关 键 词： | Luman募集因子 pEGX-LRF-N GST-LRF-N重组蛋白 单克隆抗体 |
Preparation and identification of monoclonal antibodies against Luman-recruiting factor N-terminal |
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| Institution: | LI Xiao,LAN Xiang-li,XU Xiao-bin,YANG Yan-zhou,ZHAO Bao-yu, JIN Ya-ping,WANG Ai-hua,LU Ray(Animal Biotechnology Key Laboratory of Ministry of Agriculture,College of Animal Medicine, Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Luman recruiting factor pGEX-LRF-N GST-LRF-N recombinant protein monoclonal antibody |
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