| 杠柳ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化 |
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| 引用本文： | 狄魁颖,白志军,杨书祥,贾艳晶,米爽,黄大庄.杠柳ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化[J].河北林果研究,2016(2):140-145. |
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| 作者姓名： | 狄魁颖 白志军 杨书祥 贾艳晶 米爽 黄大庄 |
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| 作者单位： | 1. 河北农业大学园林与旅游学院,河北保定,071000;2. 河北省高速公路邢衡筹建处,河北衡水,053000;3. 河北省高速公路邢衡管理处,河北衡水,053000 |
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| 基金项目： | 河北农业大学项目“杠柳遗传多样性及利用技术”(1508003) |
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| 摘 要： | 为建立适用于杠柳ISSR分子标记研究的扩增体系,进一步利用ISSR标记研究杠柳遗传多样性,探讨了杠柳ISSR分子标记中的各影响因素,分别对河北11个不同地区杠柳基因组DNA进行PCR扩增,在Taq MasterMix(康为世纪)基础上对影响ISSR-PCR扩增结果的模板DNA浓度、循环次数、引物退火温度进行梯度筛选。结果表明:在100条通用引物中共筛选出34条扩增条带清晰、整齐的ISSR引物;确立了适合杠柳ISSR分子标记的反应体系:总反应体积25μL,其中Taq MasterMix(含DNA聚合酶、MgCl_2、dNTPs、反应缓冲液以及稳定剂)12.5μL,模板DNA 1μL(70ng/μL),正向引物和反向引物各1μL(10μmol/L)。该体系的确立为今后利用ISSR技术对杠柳种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。
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| 关 键 词： | 杠柳 ISSR PCR 体系优化 |
Optimization of ISSR primer and PCR reaction system for Periploca sepium |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Periploca sepium Bunge ISSR PCR system optimization |
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