| 新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定 |
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| 引用本文： | 李旭锋,王垚,金前跃,周稳,柴永笑,陈晓,丁培阳,张改平.新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定[J].河南农业科学,2020,49(3):145-150. |
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| 作者姓名： | 李旭锋 王垚 金前跃 周稳 柴永笑 陈晓 丁培阳 张改平 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,河南郑州 450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划;河南省科技攻关计划 |
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| 摘 要： | 为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度。结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5%甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90%的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰。综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰。
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| 关 键 词： | 新城疫病毒 HN蛋白 毕赤酵母 蛋白质纯化 蛋白质活性 |
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