| 化脓隐秘杆菌间接免疫荧光方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 刘威,何深宏,任绍科,李小燕,杨雪芬,程方俊,周作勇,曹立亭.化脓隐秘杆菌间接免疫荧光方法的建立及应用[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2020,46(2):230-235. |
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| 作者姓名： | 刘威 何深宏 任绍科 李小燕 杨雪芬 程方俊 周作勇 曹立亭 |
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| 作者单位： | 西南大学动物科学学院,重庆 402460;重庆市兽医科学工程研究中心,重庆 402460;西南大学动物科学学院,重庆 402460 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2018YFD0501705)；“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAD36B00)；重庆市留学人员回国创业创新支持计划项目(CX2017103) |
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| 摘 要： | 通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法。结果表明:用冷丙酮作固定剂,10%山羊血清作封闭液,0.05%Tween–20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1∶50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1∶100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌。
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| 关 键 词： | 山羊 小鼠 化脓隐秘杆菌 高免血清 间接免疫荧光方法 特异性 灵敏度 |
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