| 稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 孙雪珂,丁培阳,王思桥,刘思源,李明慧,常泽杰,陈艺兰,李瑞琪,张改平.稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO细胞系的构建与鉴定[J].河南农业科学,2023(6):131-138. |
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| 作者姓名： | 孙雪珂 丁培阳 王思桥 刘思源 李明慧 常泽杰 陈艺兰 李瑞琪 张改平 |
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| 作者单位： | 1. 河南农业大学生命科学学院;2. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;3. 郑州大学生命科学学院;4. 江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 基金项目： | 河南省重大科技专项（221100110600）； |
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| 摘 要： | 为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV）S1蛋白的CHO细胞系，利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞，通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化，采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠，通过间接ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示，稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立，并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白；且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好，具有良好的免疫原性，中和效价为1∶128。综上，成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系，且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
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| 关 键 词： | 猪δ冠状病毒 S1蛋白 CHO细胞 稳定表达 蛋白质纯化 |
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