| 桑树ISSR-PCR反应体系建立及优化 |
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| 引用本文： | 刘玲,唐仕成,郑丹,柯皓天,吕银.桑树ISSR-PCR反应体系建立及优化[J].江苏农业科学,2020,48(10):80-85. |
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| 作者姓名： | 刘玲 唐仕成 郑丹 柯皓天 吕银 |
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| 作者单位： | 四川省丝绸工程技术研究中心,四川成都610031;四川省丝绸科学研究院,四川成都610031 |
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| 摘 要： | 采用正交试验设计L_(16)(4~5)对桑树ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、引物、Mg~(2+)、dNTPs和rTaq酶5个因素及反应程序中变性时间、退火时间、延伸时间和循环数进行优化分析。结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为DNA模板rTaq酶Mg~(2+)引物dNTPs。最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含25 ng/μL DNA模板1μL、10×PCR buffer 1μL、20μmol/L引物0.2μL、2.5 mmol/L Mg~(2+) 0.8μL、2.5 mmol/L dNTPs 1μL、5 U/μL rTaq 0.1μL。优化得到的反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性40 s,合适的退火温度退火45 s,72℃延伸90 s,40个循环;72℃延伸10 min,16℃保存。通过梯度PCR,确定引物ID37的退火温度为49.5℃。稳定性检测表明该体系能用于桑树ISSR分析。
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| 关 键 词： | 桑树 正交试验设计 ISSR-PCR 反应体系优化 |
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