| 制备大肠杆菌菌蜕的方法比较 |
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| 引用本文： | 袁橙,郭长明,左伟勇,郝福星,左沁丹,蔺辉星.制备大肠杆菌菌蜕的方法比较[J].江苏农业学报,2020,36(2):410-416. |
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| 作者姓名： | 袁橙 郭长明 左伟勇 郝福星 左沁丹 蔺辉星 |
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| 作者单位： | 江苏农牧科技职业学院动物医学院,江苏 泰州 225300;南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业部动物细菌学重点实验室,江苏 南京 210095 |
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| 基金项目： | 江苏省高等学校优秀科技创新团队项目;江苏农牧科技职业学院科研项目;国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 为进一步研究大肠杆菌菌蜕的制备技术,以pBV221、pCold IV和pETDuet1载体为基础构建了表达噬菌体E基因的溶菌质粒,并利用pETDuet1的2个多克隆位点构建了同时表达E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A的双表达溶菌质粒。经检测,pBV221-E/DH_(5α)组和pCold-E/BL_(21)组的裂解效率最高,但pCold-E/BL_(21)组的裂解起始时间晚于其他几组。诱导剂的浓度对pETDuet1-E-SNA/BL_(21)(DE3)的裂解效率有较大影响。电泳结果显示,随着E基因的表达,细菌DNA逸出膜外,同时金黄色葡萄球菌核酸酶A将DNA降解为250 bp以下的小片段。除pBV221-E/BL_(21)组外,β-丙内酯可实现对其他试验组菌蜕的完全灭活。电镜观察发现,几组菌蜕在结构上并无明显差别。与对照菌相比,菌蜕结构完整,电子密度低且不均匀,细胞膜有不同程度的皱缩。
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| 关 键 词： | 菌蜕 大肠杆菌 E基因 金黄色葡萄球菌核酸酶A 裂解效率 |
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