| 稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆 |
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| 引用本文： | 黄磊,胡建坤,俞咪娜,于俊杰,王亚会,郑梦婷,郑睿,刘永锋.稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆[J].中国农业科学,2014,47(13):2552-2562. |
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| 作者姓名： | 黄磊 胡建坤 俞咪娜 于俊杰 王亚会 郑梦婷 郑睿 刘永锋 |
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| 作者单位： | 南京农业大学生命科学学院;江苏省农业科学院植物保护研究所; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31171802);江苏省农业自主创新基金(CX(12)1003-10) |
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| 摘 要： | 【目的】研究稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）致病力丧失突变菌株B-1015，克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列，为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性，用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数，用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列，用RACE PCR克隆T-DNA标记基因，半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比，突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的降低，孢子萌发率无明显差异，致病力丧失。分子检测结果表明T-DNA在B-1015基因组中为稳定的单拷贝插入。hiTail-PCR得到的T-DNA两端侧翼序列在野生型菌株基因组上不相连，RACE PCR在两边的侧翼序列上分别克隆得到Uvt-1015R和Uvt-1015L。预测分析表明Uvt-1015R包含一个长度为948 bp的开放阅读框（open reading frame finder，ORF），可编码295个氨基酸，5′端非编码区（5′-untranslated regions，5′-UTR）长度为 341 bp，3′端非编码区（3′-untranslated regions，3′-UTR）长度为271 bp。Uvt-1015L包含一个长度为351 bp的ORF，可编码116个氨基酸，5′-UTR为31 bp，3′-UTR长度为174 bp。在已知功能的蛋白中检索，没有发现与Uvt-1015R和Uvt-1015L基因同源的蛋白。序列分析发现T-DNA插入在两个基因序列中间，RT-PCR结果显示，在突变菌株B-1015中，Uvt-1015R表达量下降，Uvt-1015L不表达。【结论】 稻曲病菌突变菌株B-1015致病力等重要生物学表型发生改变，可能是由于T-DNA的插入导致了B-1015基因组重排和Uvt-1015R、Uvt-1015L基因结构的破坏。
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| 关 键 词： | 稻曲病菌 致病力 T-DNA 基因克隆 |
| 收稿时间： | 2013-12-15 |
Molecular Cloning of T-DNA Targeted Genes of Ustilaginoidea virens Pathogenicity-Defective Mutant Strain B-1015 |
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| HUANG Lei-,HU Jian-Kun-,YU Mi-Na-,YU Jun-Jie-,WANG Ya-Hui-,ZHENG Meng-Ting-,ZHENG Rui-,LIU Yong-Feng-.Molecular Cloning of T-DNA Targeted Genes of Ustilaginoidea virens Pathogenicity-Defective Mutant Strain B-1015[J].Scientia Agricultura Sinica,2014,47(13):2552-2562. |
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| Authors: | HUANG Lei- HU Jian-Kun- YU Mi-Na- YU Jun-Jie- WANG Ya-Hui- ZHENG Meng-Ting- ZHENG Rui- LIU Yong-Feng- |
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| Institution: | 1、College of Life Sciences, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095;
2、Institute of Plant Protection, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ustilaginoidea virens pathogenicity T-DNA gene clone |
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