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紫花苜蓿盐诱导类受体蛋白激酶基因MsSIK1的克隆及功能分析
引用本文:郭鹏,邢鑫,张万筠,姜健.紫花苜蓿盐诱导类受体蛋白激酶基因MsSIK1的克隆及功能分析[J].中国农业科学,2014,47(23):4573-4581.
作者姓名:郭鹏  邢鑫  张万筠  姜健
作者单位:1大连民族学院环境与资源学院,辽宁大连 116600 2 威海市农业局,山东威海 264200
基金项目:国家自然科学基金(31170168);辽宁省科技计划(2011209001);新疆科技支疆项目(201191126);辽宁省高等学校优秀科技人才项目(LR2013055)
摘    要:【目的】对紫花苜蓿(Medicago sativa L. cv. Zhongmu-1)stress-induced protein kinase gene 1(MsSIK1)进行克隆与表达研究,了解该基因的分子机制及其应用。【方法】以紫花苜蓿叶片总RNA为模板,根据同源克隆设计简并引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得MsSIK1的编码序列。利用同源性比对进行序列分析。通过SMART网站(http://smart.embl-heidelberg.de/)模拟该基因的蛋白结构。构建MsSIK1的亚细胞定位瞬时表达载体,使用基因枪转化法将MsSIK1与GFP在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。通过Real time-PCR分析MsSIK1在NaCl、ABA和干旱处理条件下的表达特征。利用农杆菌侵染方法获得转基因拟南芥植株,通过RT-PCR对转基因植株进行表达鉴定,获得转基因植株后,利用转基因株系进行盐处理进而对成苗期转基因拟南芥性状鉴定。在盐胁迫处理下,测定野生型与转基因株系的叶绿素含量、MDA含量进而验证该基因的抗盐功能。【结果】获得MsSIK1编码序列2 478 bp,编码825个氨基酸。该蛋白C端与多种植物激酶具有相当高的同源性,模拟蛋白结构发现该基因具有类受体蛋白激酶高度保守的丝氨酸/苏氨酸结构域、跨膜结构域和富含亮氨酸重复序列的膜外结构域。Real time-PCR分析表明该基因在NaCl、ABA和干旱处理条件下上调表达,其中在盐处理条件下,MsSIK1表达先升高后降低,在处理4 h时达到最大值(约为对照值的7倍)。在干旱胁迫处理时,MsSIK1受诱导表达增强明显,当处理2 h时表达量达到最大值(约为对照值的6倍);ABA处理时,MsSIK1被诱导表达明显,当处理3 h时表达量达到最大值,约为对照值的6.8倍。MsSIK1GFP融合瞬时表达的洋葱表皮细胞中的荧光信号主要集中于质膜附近,转化空载体的洋葱表皮细胞中的荧光信号分布于细胞各个部位。转基因植株的RT-PCR鉴定表明,T1代6个株系中所得到的MsSIK1条带明显、亮度高,且T1-10中表达量最高;但在野生型中检测不到该条带,说明外源基因已经整合到拟南芥染色体中并能遗传到子代。成苗期转基因拟南芥盐处理后发现T3-2、T3-6、T3-10转基因株系较野生型植株长势好,说明MsSIK1的转入提高了拟南芥的抗盐性。与对照相比,转MsSIK1拟南芥在NaCl处理下,叶绿素含量下降较少,其中,野生型叶绿素含量降低了77%,T3-3降低了53%,T3-6降低了44%,T3-10降低了35%;同样盐胁迫下,3个转基因株系的MDA含量积累较少,其中,野生型MDA的含量是T3-10株系的1.3倍。【结论】MsSIK1作为一个类受体蛋白激酶受多种逆境胁迫诱导,该基因的过量表达提高了拟南芥的抗盐性。

关 键 词:紫花苜蓿  MsSIK1  类受体蛋白激酶  盐胁迫  功能研究  
收稿时间:2014-04-14

Cloning and Function Analysis of a Salt-Stress-Induced Receptor Like Protein Kinase Gene MsSIK1 from Alfalfa
GUO Peng,XING Xin,ZHANG Wan-jun,JIANG Jian.Cloning and Function Analysis of a Salt-Stress-Induced Receptor Like Protein Kinase Gene MsSIK1 from Alfalfa[J].Scientia Agricultura Sinica,2014,47(23):4573-4581.
Authors:GUO Peng  XING Xin  ZHANG Wan-jun  JIANG Jian
Institution:1College of Environment and Resources, Dalian Nationalities University, Dalian 116600, Liaoning 2Weihai Agricultural Bureau, Weihai 264200, Shandong
Abstract:
Keywords:alfalfa  MsSIK1  receptor like protein kinase  salt stress  functional study
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