| 改进原位循环灌流法分离小鼠肝细胞研究 |
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| 引用本文： | 潘君风,姜 颖,贺福初.改进原位循环灌流法分离小鼠肝细胞研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(11):180-186. |
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| 作者姓名： | 潘君风 姜 颖 贺福初 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 生命科学学院；北京蛋白质组研究中心 蛋白质组学国家重点实验室;北京蛋白质组研究中心 蛋白质组学国家重点实验室；军事医学科学院 放射医学研究所;北京蛋白质组研究中心 蛋白质组学国家重点实验室；军事医学科学院 放射医学研究所 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划（973）项目“人类肝脏蛋白质组重要科学问题研究”（2006CB910801）;国家自然科学基金创新研究群体科学基金项目（30621063） |
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| 摘 要： | 【目的】建立小鼠肝细胞分离原位循环灌流方法,为肝脏细胞蛋白质组研究提供技术技持。【方法】参考Seglen胶原酶两步原位灌流法,对其进行改进,建立原位循环灌流分离小鼠肝细胞方法,对小鼠肝脏进行原位循环灌流,离体消化肝脏组织,差速离心获得纯化小鼠肝细胞;台盼蓝拒染试验检测肝细胞活性,常规血球计数法计算肝细胞得率;利用显微形态观察、HE、PAS及免疫细胞化学等检测方法鉴定所获得的肝细胞纯度;用含体积分数20%FBS的RPMI-1640细胞营养液对原代小鼠肝细胞进行培养。【结果】建立了原位循环灌流分离小鼠肝细胞的方法,采用该方法可从每只小鼠肝脏中成功分选到细胞活性大于90%、纯度在95%以上的(4.2×107)～(6.5×107)个肝细胞。原代分离的小鼠肝细胞培养4h后,大多数细胞可贴壁,12h后贴壁完全,细胞呈伸张状态,该原代肝细胞可持续培养7d以上,且细胞形态状况良好。【结论】成功建立了小鼠肝脏原位循环灌流试验体系,获得了纯度和活性均较高的小鼠肝细胞,分选所得的小鼠肝细胞完全满足构建肝细胞蛋白质组表达谱试验的需要。
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| 关 键 词： | 小鼠肝脏 原位循环灌流 肝细胞 蛋白质表达谱 |
| 收稿时间： | 4/7/2011 12:00:00 AM |
Improved in situ circulatory perfusion method of separating mice hepatocytes |
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| PAN Jun-feng,JIANG Ying,HE Fu-chu,DUAN Min,GUO Ai-guang.Improved in situ circulatory perfusion method of separating mice hepatocytes[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(11):180-186. |
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| Authors: | PAN Jun-feng JIANG Ying HE Fu-chu DUAN Min GUO Ai-guang |
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| Institution: | PAN Jun-feng1,2,JIANG Ying2,3,HE Fu-chu2,DUAN Min1,GUO Ai-guang1(1 College of Life Sciences,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China,2 State Key Laboratory of Proteomics,Beijing Proteome Research Center,Beijing 102206,3 Beijing Institute of Radiation Medicine,Beijing 100850,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mouse liver in situ circulatory perfusion hepatocytes protein expression profiling |
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