| 鳗鲡疱疹病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 李英英,杨金先,陈曦,陈强,宋铁英,葛均青.鳗鲡疱疹病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].水产学报,2021,45(5):769-777. |
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| 作者姓名： | 李英英 杨金先 陈曦 陈强 宋铁英 葛均青 |
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| 作者单位： | 福建省农科院生物技术研究所,福建省农科院生物技术研究所,福建省农科院生物技术研究所,福建省农科院生物技术研究所,福建省农科院生物技术研究所,福建省农科院生物技术研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31101933）;福建省公益类科研院所基本科研专项（2017R1019-5）；福建省农业科学院项目（AC2017-1） |
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| 摘 要： | 目的]建立鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR（qPCR)检测方法。方法]利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列，克隆至pET-32a载体，构建重组质粒pET-32a-ORF49，作为qPCR的标准品；根据ORF49序列设计引物，以梯度稀释的重组质粒为模版，进行SYBR Green Ⅰ qPCR扩增，制作标准曲线，建立AngHV的qPCR检测方法，并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。结果]结果显示，qPCR的Ct值与标准品的拷贝数线性关系良好，且线性范围广，获得的标准曲线的相关系数（R2）达到0.999，扩增效率为100.855%；该方法特异性好，仅特异性检测AngHV，而对鲤疱疹病毒Ⅲ型（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3）、蛙虹彩病毒（Rana grylio virus, RGV）和鳗鲡虹彩病毒（Eel iridovirus, EIV）无扩增；该方法重复性好，组内和组间变异系数均小于2%；该方法灵敏性高于普通PCR法，最低可检测到10个病毒拷贝，而普通PCR法为1000个病毒拷贝。应用分析结果表明，感染AngHV的欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla）的主要组织器官内均可检测到AngHV，并且鳃、鳍和皮肤黏液内的病毒量明显高于其他组织器官；对保存的25份疑似鳗鲡“脱黏败血综合征”病料进行检测，阳性检出率为96%，而普通PCR法的阳性检出率仅为76%。结论]本研究建立的AngHV SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可用于AngHV的快速和定量检测，对鳗鲡“脱黏败血综合征”的防控也具有重要意义。
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| 关 键 词： | 鳗鲡疱疹病毒 荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ 检测 方法 |
| 收稿时间： | 2020/7/8 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2020/11/30 0:00:00 |
Establishment and application of SYBR Green I real-time fluorescence quantitative PCR for detection of Anguillid herpesvirus |
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| LI Yingying,YANG Jinxian,CHEN Xi,CHEN Qiang,SONG Tieying,GE Junqing.Establishment and application of SYBR Green I real-time fluorescence quantitative PCR for detection of Anguillid herpesvirus[J].Journal of Fisheries of China,2021,45(5):769-777. |
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| Authors: | LI Yingying YANG Jinxian CHEN Xi CHEN Qiang SONG Tieying GE Junqing |
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| Institution: | Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agricultural Science,Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agricultural Science,Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agricultural Science,Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agricultural Science,Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agricultural Science,Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agricultural Science |
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| Abstract: | |
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