| 尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立 |
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| 引用本文： | 王建华,赵祥平,董志珍,肖妍,王玉玲,张俊哲,陈小金,王乃福,陈本龙.尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立[J].动物医学进展,2016(1):11-16. |
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| 作者姓名： | 王建华 赵祥平 董志珍 肖妍 王玉玲 张俊哲 陈小金 王乃福 陈本龙 |
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| 作者单位： | 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心,天津,300456 |
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| 基金项目： | 天津市滨海新区科技计划项目(2013-BK15H013)，天津市科技支撑项目(13ZCZDNCO1300) |
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| 摘 要： | 根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL~4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL~5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6%,显示其良好的可重复性。该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应。用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性。本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。
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| 关 键 词： | 尼帕病毒 猪流感病毒 TaqMan-MGB探针 双重荧光定量RT-PCR |
Development of a Duplex Real-time RT-PCR for the Differential Detection of Nipha Virus and Swine Influenza Virus |
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