| 一种用于高效筛选极端酶突变基因的质粒营救法 |
| |
| 引用本文： | 柯涛,胡凡,石晴芳,马向东.一种用于高效筛选极端酶突变基因的质粒营救法[J].华中农业大学学报,2009,28(1). |
| |
| 作者姓名： | 柯涛 胡凡 石晴芳 马向东 |
| |
| 作者单位： | 1. 河南省南阳师范学院生命科学与技术学院,南阳,473061
2. 湖北大学生命科学学院,武汉,430062 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，河南省教育厅自然科学研究计划项目，湖北省教育厅重点课题 |
| |
| 摘 要： | 为简化定向进化筛选突变耐高温和耐酸碱酶等极端酶的繁复工作,建立了一种快速质粒营救法,可直接从加热处理的平板中回收携带有突变基因的质粒,用于进一步的随机突变基因的筛选和基因测序等.研究了在不同的热处理条件下的质粒营救效率,获得了质粒营救转化效率最高的处理条件.结果表明,本方法适于质粒大小在2～10 kb范围的载体,可用于平板筛选最适酶活性温度在60～100℃、pH 4～10的突变体酶,并可将一轮的筛选过程缩短1～2 d.
|
| 关 键 词： | 定向进化 筛选 质粒营救 极端酶 |
Plasmid Rescue Method for Highly Efficient Screening of Extrenmzyme Mutant Gene |
| |
| KE Tao,HU Fan,SHI Qing-fang,MA Xiang-dong.Plasmid Rescue Method for Highly Efficient Screening of Extrenmzyme Mutant Gene[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2009,28(1). |
| |
| Authors: | KE Tao HU Fan SHI Qing-fang MA Xiang-dong |
| |
| Abstract: | A plasmid rescue method to release plasmid DNA from Escherichia coli by heat treatment was used to screen the extremozyme mutants from directed evolution mutagenesis library.Plasmid rescue efficiency was measured under different heat treatment conditions.The effects of optimal process parameters on the efficiency of plasmid rescue and scope of applications were defined.The whole preparation requires 2~3 hours only.To screen recombinant clones rapidly,this method is better than traditional methods.It is very... |
| |
| Keywords: | directed evolution screening plasmid rescue extremozyme |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《华中农业大学学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《华中农业大学学报》下载免费的PDF全文 |
