| 范式酵母Wss1金属蛋白酶的原核表达与理化性质 |
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| 引用本文： | 罗亦欣,奚绪光,单丽伟,等.范式酵母Wss1金属蛋白酶的原核表达与理化性质[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2017,45(4):173-179. |
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| 作者姓名： | 罗亦欣 奚绪光 单丽伟 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 生命科学学院，理学院 |
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| 基金项目： | 中央高校基本科研业务费专项（2014YB032）；教育部回国人员科研启动基金项目（11304252） |
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| 摘 要： | 【目的】建立范式酵母(Vanderwaltozyma polyspora)Wss1(VpWss1)金属蛋白酶的原核表达纯化系统,对该蛋白酶的均一性和自切活性进行初步分析,为VpWss1的晶体制备及结构解析奠定基础。【方法】构建VpWss1基因的融合表达载体,将其转化入E.coli 2566菌株中进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和柱和SP阳离子交换柱对融合蛋白进行纯化。通过动态激光散射仪(DLS)和Superdex 200分子筛对该蛋白酶的均一性和聚集状态进行分析,同时与不同类型和长度的DNA底物孵育,分析野生型和突变型SUMO VpWss1蛋白的自切活性。【结果】表达纯化的目的蛋白SUMO VpWss1/SUMO VpWss1~(E96Q)为可溶性蛋白,分子质量约为50ku,纯度95%。野生型SUMO VpWss1蛋白均一性较差,呈现多种状态,但突变型SUMO VpWss1~(E96Q)蛋白的均一性较好,其主要单一状态(Mass)的含量达到93.2%。在不同类型和长度DNA下,野生型SUMO VpWss1均可发生自切,且随DNA长度的延长呈现出先增强后减弱的趋势,而突变型SUMO VpWss1~(E96Q)的自切活性显著减弱。【结论】成功表达纯化了金属蛋白酶SUMO VpWss1及其突变体SUMO VpWss1~(E96Q),明晰了两者的均一性和自切活性。
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| 关 键 词： | VpWss1金属蛋白酶 DNA-蛋白交联物 均一性 自切活性 |
| 收稿时间： | 2016/1/14 0:00:00 |
Prokaryotic expression and physicochemical properties of Vanderwaltozyma polyspora Wss1 |
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| LUO Yixin,XI Xuguang and SHAN Liwei,et al.Prokaryotic expression and physicochemical properties of Vanderwaltozyma polyspora Wss1[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2017,45(4):173-179. |
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| Authors: | LUO Yixin XI Xuguang and SHAN Liwei |
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