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| 斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因shRNA干扰载体的构建及效果评价 | |
| 引用本文： | 黄桂菊,陈健光,喻达辉,曾令兵,龙华.斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因shRNA干扰载体的构建及效果评价[J].水产学报,2012,36(3). |
| 作者姓名： | 黄桂菊 陈健光 喻达辉 曾令兵 龙华 |
| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部海水养殖生态与质量控制重点开放实验室,广东广州510300;中国水产科学研究院长江水产研究所,农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室,湖北荆州434000;中国水产科学研究院长江水产研究所,淡水生态与健康养殖重点开放实验室,湖北荆州434000 2. 中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部海水养殖生态与质量控制重点开放实验室,广东广州510300 3. 中国水产科学研究院长江水产研究所,农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室,湖北荆州434000;中国水产科学研究院长江水产研究所,淡水生态与健康养殖重点开放实验室,湖北荆州434000 |
| 摘 要： | 利用Invitrogen公司的在线生物学软件分析斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因,设计针对CP基因不同位置的小发卡RNA( short hairpin RNA,shRNA)干扰序列其结构特征为正链( 19 nt) -环(4 nt) -负链(19 nt)].化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体pENTRTM/U6中,构建shRNA干扰载体pshRNA -124、pshRNA-896和pshRNA-NNV.然后,用脂质体转染法分别将3种shRNA干扰载体和pEGFP-CP基因共转染导入黑头呆鱼(FHM)肌肉细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度,分析荧光抑制效率,Real-time RT-PCR检测CP基因mRNA的表达水平变化.结果表明,在pEGFP-CP与shRNA干扰载体共转染组,pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV的荧光抑制效率分别为47％、68％、51％.3种shRNA干扰载体都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中pshRNA-896干扰效率最好.Real-time RT-PCR检测表明,干扰质粒pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV对pEGFP-CP基因的沉默效率分别约为60％、96％和55％,与对照组相比差异显著(P＜0.05).研究表明,靶向斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因的shRNA干扰载体构建成功,为进一步运用RNA干扰技术进行CP基因的功能研究奠定了基础. |
| 关 键 词： | 斜带石斑鱼 神经坏死病毒 CP基因 shRNA干扰载体 |
Construction and evaluation of short hairpin RNA interference vector targeting CP gene of Epinephelus coioides nervous necrosis virus |
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| HUANG Gui-ju , CHEN Jian-guang , YU Da-hui , ZENG Ling-bing , LONG Hua.Construction and evaluation of short hairpin RNA interference vector targeting CP gene of Epinephelus coioides nervous necrosis virus[J].Journal of Fisheries of China,2012,36(3). | |
| Authors: | HUANG Gui-ju CHEN Jian-guang YU Da-hui ZENG Ling-bing LONG Hua |
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