| 广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体构建 及其相关生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 黄叶,吴延军,朱思燃,奉玲丽,瞿秋红,江雨航,夏琴,崔悦悦,莫家远,兰干球.广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体构建 及其相关生物信息学分析[J].南方农业学报,2019,50(3):468-476. |
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| 作者姓名： | 黄叶 吴延军 朱思燃 奉玲丽 瞿秋红 江雨航 夏琴 崔悦悦 莫家远 兰干球 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院,南宁,530004 |
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| 基金项目： | 广西创新驱动发展专项项目 |
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| 摘 要： | 目的]构建广西巴马小型猪结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体并鉴定其活性,为深入研究CT-GF在癌症发生中的作用及其分子机制提供参考,也为构建CTGF转基因广西巴马小型猪及研发基于CTGF的癌症基因治疗策略提供理论依据.方法]利用RT-PCR从广西巴马小型猪肝脏组织中克隆CTGF基因,并将CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上,然后通过脂质体转染小鼠Hep3B细胞,转染48 h后于荧光显微镜下观察细胞是否表达红色荧光蛋白,同时利用在线生物信息学软件对其理化性质进行分析.结果]成功克隆获得广西巴马小型猪CTGF基因编码区(CDS)序列,序列全长1050 bp,共编码349个氨基酸,与NCBI上已公布普通猪参考序列的同源性为99.5%,有5处碱基突变,且均为同义突变.将广西巴马小型猪CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体,转染小鼠Hep3B细胞48 h后有红色荧光蛋白表达.广西巴马小型猪CTGF蛋白具有较强的亲水性,其二级结构中α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲各占13.18%、5.73%、17.48%和63.61%.结论]广西巴马小型猪CTGF基因在进化过程中的保守性非常稳定,通过构建的真核表达载体能转染小鼠Hep3B细胞并成功表达,可用于生产转基因广西巴马小型猪及研发与CTGF基因有关的疾病模型.
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| 关 键 词： | 广西巴马小型猪 CTGF基因 小鼠Hep3B细胞 脂质体转染 生物信息学 |
Construction of eukaryotic expression vector of CTGF gene in Guangxi Bama miniature pig and related bioinformatics analysis |
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| HUANG Ye,WU Yan-jun,ZHU Si-ran,FEN Ling-li,QU Qiu-hong,JIANG Yu-hang,XIA Qin,CUI Yue-yue,MO Jia-yuan,LAN Gan-qiu.Construction of eukaryotic expression vector of CTGF gene in Guangxi Bama miniature pig and related bioinformatics analysis[J].Journal of Southern Agriculture,2019,50(3):468-476. |
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| Authors: | HUANG Ye WU Yan-jun ZHU Si-ran FEN Ling-li QU Qiu-hong JIANG Yu-hang XIA Qin CUI Yue-yue MO Jia-yuan LAN Gan-qiu |
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