| 玉米ZmICS1和ZmSARD1的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 上官晓庆,张春霞,赵天永.玉米ZmICS1和ZmSARD1的原核表达及多克隆抗体制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2022,50(9):18-24. |
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| 作者姓名： | 上官晓庆 张春霞 赵天永 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08003-001) |
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| 摘 要： | 【目的】将玉米异分支酸合成酶1（ZmICS1）及系统获得抗性缺陷1（ZmSARD1）进行原核表达和纯化，并免疫家兔获得多克隆抗体，为深入研究ZmICS1和ZmSARD1在玉米抵抗病原菌胁迫中的功能奠定基础。【方法】克隆玉米ZmICS1和ZmSARD1基因CDS区，连接到原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2（DE3），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达His×6-ZmICS1和His×6-ZmSARD1重组蛋白，以透析纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔，制备多克隆抗体，并进行验证和检测。【结果】成功构建了原核表达载体pET-28a-ZmICS1和pET-28a-ZmSARD1，于37 ℃、0.84 mmol/L IPTG在大肠杆菌表达菌株Rosett-gami2（DE3）中诱导出His×6-ZmICS1和His×6-ZmSARD1重组蛋白。纯化蛋白免疫家兔，所得ZmICS1抗体能够检测到3 ng的His×6-ZmICS1，ZmSARD1抗体能检测到低至0.3 ng的His×6-ZmSARD，且分别能特异性地检测玉米B73原生质体过表达的ZmICS1和ZmSARD1蛋白。【结论】成功制备了玉米ZmICS1、ZmSARD1多克隆抗体，可用于玉米内源ZmICS1和ZmSARD1蛋白含量的检测。
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| 关 键 词： | 玉米 ICS1蛋白 SARD1蛋白 原核表达 抗体制备 |
| 收稿时间： | 2021/10/14 0:00:00 |
Prokaryotic expression and antibody preparation of maize ZmICS1 and ZmSARD1 |
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| SHANGGUAN Xiaoqing,ZHANG Chunxi,ZHAO Tianyong.Prokaryotic expression and antibody preparation of maize ZmICS1 and ZmSARD1[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2022,50(9):18-24. |
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| Authors: | SHANGGUAN Xiaoqing ZHANG Chunxi ZHAO Tianyong |
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