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| 马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 | |
| 引用本文： | 胡月,戚亭,胡哲,关平原,王晓钧.马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].中国预防兽医学报,2014,36(12). |
| 作者姓名： | 胡月 戚亭 胡哲 关平原 王晓钧 |
| 作者单位： | 1. 内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,内蒙古呼和浩特010018;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒创新团队,黑龙江哈尔滨150001 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒创新团队,黑龙江哈尔滨,150001 3. 内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,内蒙古呼和浩特,010018 |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划，公益性行业(农业)科研专项经费项目 |
| 摘 要： | 为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.结果表明,该方法在102拷贝/μL～107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;最低检出量为1015 TCID50/mL病毒,敏感性为常规RT-PCR的100倍,与其他马常见病毒无交叉反应;组内及组间重复性试验的变异系数均小于2％,具有较好的重复性.此外,采用该方法测定了EAV Bucyrus株及其拯救病毒icEAV感染RK-13细胞后的复制动态,并与TCID50方法进行了比较.结果显示icEAV与其亲本病毒接种RK-13细胞后,0h测定病毒TCID50及拷贝数分别为103.33TCID50/mL(1 04 65拷贝/2μL)和10350 TCID50/mL(104 70拷贝/2μL);60 h时,细胞病变达到100％,icEAV及其亲本病毒的TCID50及拷贝数分别为105.67TCID50/mL(107 0拷贝/2μL)和105.57 TCID50/mL(106 98拷贝/2μL),两株病毒在RK-13细胞内的复制效率相似.本研究建立的Eva Green qRT-PCR方法可以为细胞培养物中EAV的检测提供有效的技术手段. |
| 关 键 词： | 马动脉炎病毒 qRT-PCR Eva Green 病毒含量 |
Development and application of Eva Green qRT-PCR assay for detection of equine arteritis virus |
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| HU Yue,QI Ting,HU Zhe,GUAN Ping-yuan,WANG Xiao-jun.Development and application of Eva Green qRT-PCR assay for detection of equine arteritis virus[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2014,36(12). | |
| Authors: | HU Yue QI Ting HU Zhe GUAN Ping-yuan WANG Xiao-jun |
| Abstract: | |
| Keywords: | equine arteritis virus qRT-PCR Eva Green viral load |