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| 牛膝ISSR-PCR反应体系的优化 | |
| 引用本文： | 王强,金则新,祁彩虹,李钧敏,彭礼琼.牛膝ISSR-PCR反应体系的优化[J].江苏农业科学,2011,39(5). |
| 作者姓名： | 王强 金则新 祁彩虹 李钧敏 彭礼琼 |
| 作者单位： | 1. 上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234;台州学院生态研究所,台州临海317000 2. 台州学院生态研究所,台州临海,317000 3. 台州学院生态研究所,台州临海317000;西南大学三峡库区生态环境教育部重点实验室,重庆400715 4. 台州学院生态研究所,台州临海317000;北京林业大学自然保护区学院,北京100083 |
| 摘 要： | 采用改进的SDS法提取牛膝(Achyranthes bidentata)基因组DNA,利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于牛膝ISSR分析的扩增条件:10 μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol/L Tris·HC1,pH值8.8,100 mmol/LKCl,1％ TritonX - 100,100 mmol/L( NH4) 2SO4,15 mmol/L MgCl2),1.5 UTaq DNA聚合酶,2 mg/mL BSA,15 ng模板DNA,10 pmol引物,0.5 mmol/L dNTP,2.0 mmol/L Mg2.利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对24个牛膝个体的DNA进行扩增,共得到85个位点,其中74个为多态位点,多态位点百分率为87.06％,Nei指数为0.330 3,Shannon信息指数为0.490 5,表明牛膝的遗传多样性处于较高水平. |
| 关 键 词： | 牛膝 ISSR 优化 遗传多样性 |
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