| 半滑舌鳎黑色素聚集激素重组制备与生物活性分析 |
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| 引用本文： | 朱学武,徐永江,柳学周,史宝,王滨,李斌.半滑舌鳎黑色素聚集激素重组制备与生物活性分析[J].水产学报,2016,40(10):1595-1605. |
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| 作者姓名： | 朱学武 徐永江 柳学周 史宝 王滨 李斌 |
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| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛266071;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;2. 中国水产科学研究院黄海水产研究所,山东青岛,266071 |
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| 基金项目： | 国家鲆鲽类产业技术体系项目（CARS-50） |
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| 摘 要： | 根据半滑舌鳎黑色素聚集激素(MCH1)的c DNA序列设计特异性引物扩增成熟肽片段,利用原核表达载体p ET-32a成功构建了重组MCH1/p ET32a质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导可产生N端含6个组氨酸的重组蛋白。半滑舌鳎MCH1重组蛋白大小为29.9 ku,32°C条件下以0.2 mmol/L IPTG诱导6 h时目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的49.8%。Western blotting免疫印迹表明,MCH1重组蛋白可被6×His抗体特异性识别。经Ni2+-NTA亲和柱纯化,可获得高纯度的MCH1重组蛋白。采用垂体离体孵育方法测试蛋白活性,MCH1重组蛋白可有效刺激或抑制垂体MCH和MSH肽的分泌,MCH肽水平先上升后下降,在100 nmol/L达到峰值,MSH肽水平显著升高。随着外源MCH1重组蛋白浓度的增加,垂体MCH1和MCH2 m RNA表达都呈现先上升后下降的趋势,POMCa和PACAP m RNA表达都呈现明显下降趋势,而POMC-b、MCHR1、MCHR2、MITF基本没有变化,表明获得的半滑舌鳎MCH1重组蛋白具有调节垂体激素分泌和基因表达的生理功能。本研究可为研制半滑舌鳎无眼侧黑化调控的专用生物制剂提供理论与技术依据。
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| 关 键 词： | 半滑舌鳎 黑色素聚集激素 原核表达 生物活性 |
| 收稿时间： | 2015/11/27 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/5/10 0:00:00 |
In vitro expression and bioactivity analysis of melanin concentration hormone from Cynoglossus semilaevis |
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| ZHU Xuewu,XU Yongjiang,LIU Xuezhou,SHI Bao,WANG Bin and LI Bin.In vitro expression and bioactivity analysis of melanin concentration hormone from Cynoglossus semilaevis[J].Journal of Fisheries of China,2016,40(10):1595-1605. |
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| Authors: | ZHU Xuewu XU Yongjiang LIU Xuezhou SHI Bao WANG Bin and LI Bin |
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| Institution: | Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China and Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cynoglossus semilaevis melanin concentration hormone prokaryotic expression bioactivity |
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