| 猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 |
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| 引用本文： | 商晓桂,郭伟,杨莲茹,杨志彪,华修国,朱建国,崔立.猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[J].畜牧兽医学报,2010,41(8). |
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| 作者姓名： | 商晓桂 郭伟 杨莲茹 杨志彪 华修国 朱建国 崔立 |
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| 作者单位： | 1. 上海交通大学农业与生物学院,上海,200240;内蒙古农业大学动物医学与科学学院,呼和浩特,010018
2. 内蒙古农业大学动物医学与科学学院,呼和浩特,010018
3. 上海交通大学农业与生物学院,上海,200240 |
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| 摘 要： | 本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增ORF2基因片段,将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,猪星状病毒荧光定量PCR的标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线特异,灵敏度可达1×101拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好。本次建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法具有快速、简便、敏感等优点,有重要的实用价值。
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| 关 键 词： | SYBR Green Ⅰ 猪星状病毒 检测 |
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