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| 鳞头犬牙南极鱼LeptinB基因在抵御低温应激中的作用 | |
| 作者姓名： | 万金铭 王映 陈良标 |
| 作者单位： | 上海海洋大学 国家海洋生物科学国际联合研究中心 水产种质资源发掘与利用教育部 重点实验室 上海 201306;上海海洋大学 国家海洋生物科学国际联合研究中心 水产种质资源发掘与利用教育部 重点实验室 上海 201307;上海海洋大学 国家海洋生物科学国际联合研究中心 水产种质资源发掘与利用教育部 重点实验室 上海 201306；上海海洋大学 水产科学国家级实验教学示范中心 上海 20130 |
| 摘 要： | 为了探究瘦素基因(LeptinB, LepB)在斑马鱼肝脏细胞系(ZFL)低温应激中的作用，本研究根据鳞头犬牙南极鱼(Dissostichus mawsoni) LepB基因(DM-LepB)编码的氨基酸序列，克隆到构建的pTOL2-actin-EGFP质粒中(启动子为斑马鱼的β-actin)。选取EcoRⅠ和BamHⅠ为限制酶，设计构建了pTOL2-LepB+HIS-EGFP表达载体，并转染至ZFL细胞中。选择致死温度10 ℃进行实验，采用流式细胞术检测了低温胁迫下细胞的存活率，使用增强型CCK-8试剂盒检测了低温条件下细胞的生长增殖情况，使用荧光探针DHE检测了细胞活性氧(ROS)含量。结果显示，LepB基因的过表达能有效减少细胞ROS的产生，减轻细胞凋亡以应对低温胁迫。分析还显示，DM-LepB的过表达也有利于维持低温刺激下的胞内ATP水平与线粒体状态，有效减轻低温刺激对细胞的凋亡和坏死作用，对细胞冷应激起到保护作用。采用油红O染色和甘油三酯(TG)实验检测发现，DM-LepB基因能减缓低温刺激时细胞脂质的消耗，较多的脂质保留可减弱低温刺激对细胞的伤害，使得细胞能更好地抵抗低温损害。研究结果为揭示南极鱼类的低温适应分子机制提供了基础资料。 |
| 关 键 词： | 鳞头犬牙南极鱼 LeptinB 低温应激 细胞凋亡 脂质代谢 |
| 收稿时间： | 2023/4/18 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/5/18 0:00:00 |
Role of the Dissostichus mawsoni LeptinB gene in cellular cold resistance |
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| Authors: | WAN Jinming WANG Ying CHEN Liangbiao |
| Institution: | International Research Center for Marine Biosciences, Ministry of Science and Technology; Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources, Ministry of Education, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;International Research Center for Marine Biosciences, Ministry of Science and Technology; Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources, Ministry of Education, Shanghai Ocean University, Shanghai 201307, China; International Research Center for Marine Biosciences, Ministry of Science and Technology; Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources, Ministry of Education, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; National Demonstration Center for Experimental Fisheries Science Education, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Dissostichus mawsoni LeptinB Low-temperature stress Apoptosis Lipid metabolism |
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