| 枫香ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选 |
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| 引用本文： | 黄敏,黄旭萍,李斌奇,张毅智,林龙,陈发兴.枫香ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选[J].分子植物育种,2023(9):2991-2998. |
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| 作者姓名： | 黄敏 黄旭萍 李斌奇 张毅智 林龙 陈发兴 |
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| 作者单位： | 1. 福建农林大学园艺学院;2. 福建省林业科技试验中心 |
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| 摘 要： | 为探索最适的枫香叶片DNA提取方法、最优ISSR引物和最佳ISSR-PCR扩增反应体系，本试验采用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、高盐低pH法和试剂盒法提取枫香叶片DNA；采用三因素五水平(DNA模板用量,2×Taq Master Mix用量引物浓度)正交试验构建并优化枫香的ISSR-PCR反应体系；对100条ISSR引物进行筛选及其退火温度优化。结果表明：改良CTAB方法提取的DNA浓度高，且电泳条带清晰无污染；SDS和试剂盒方法提取DNA的浓度低，电泳条带亮度低；高盐低pH值法提取的DNA的电泳条带模糊且降解拖尾现象严重。DNA模板浓度为20 ng、Taq Master Mix用量为10μL、引物浓度为0.6μmol/L、ddH2O为7.8μL时扩增程序的条带最清晰、多态性最好。筛选出17条重复性强、条带清晰明亮、多态性高的ISSR引物及其最适退火温度，其中扩增位点数最多的为引物UBC-834、UBC-836和UBC-853，扩增位点均为13个，以UBC-878为ISSR引物时的扩增反应中，当退火温度在46.9℃的时候能够扩...
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| 关 键 词： | 枫香 改良CTAB法 DNA提取 ISSR-PCR 引物筛选 |
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