| GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立 |
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| 引用本文： | 汪浩,乔绪稳,陈瑾,李图帅,张元鹏,侯继波,郑其升,孙卫东.GEM技术浓缩纯化O型口蹄疫病毒灭活抗原方法的建立[J].南京农业大学学报,2018(1). |
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| 作者姓名： | 汪浩 乔绪稳 陈瑾 李图帅 张元鹏 侯继波 郑其升 孙卫东 |
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| 作者单位： | 国家兽用生物制品工程技术研究中心;南京农业大学动物医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; |
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| 摘 要： | 目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PAGE、Western-blot、蛋白含量测定及146S测定等方法对浓缩纯化方法的可行性进行鉴定,并通过动物免疫试验初步验证浓缩纯化后抗原的免疫原性。结果]VPA融合蛋白能够在大肠杆菌中部分可溶性表达。作为接头蛋白,VPA既能与GEM颗粒结合,又能与FMDV抗原结合。SDS-PAGE与Western-blot结果表明:FMDV通过GEM法得到有效纯化;146S测定结果表明FMDV的回收效率达到99%;总蛋白含量测定结果显示口蹄疫抗原杂蛋白去除率达到90%;动物免疫试验结果显示GEM技术纯化后的FMDV具有良好的免疫原性。结论]利用GEM技术浓缩纯化口蹄疫病毒抗原是可行的。
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