| 表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用 |
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| 引用本文： | 苏鑫铭,徐亚林,于春梅,曹瑞兵,周斌,陈溥言.表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用[J].南京农业大学学报,2007,30(4):114-119. |
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| 作者姓名： | 苏鑫铭 徐亚林 于春梅 曹瑞兵 周斌 陈溥言 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095
2. 南京医科大学微生物与免疫学教研室,江苏,南京,210029 |
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| 摘 要： | 根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400 μg·mL-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre.利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达.结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419.将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293.S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失.测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去.以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合.
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| 关 键 词： | 伪狂犬病病毒 PCR Cre重组酶 真核细胞系 loxP 稳定表达 重组酶 真核 细胞系 伪狂犬病 病毒 研究构建 应用 Pseudorabies virus recombination application cell lines 整合 快速 外源基因 基因组 基因序列 作用 测序 染色 |
| 文章编号： | 1000-2030（2007）04-0114-06 |
| 修稿时间： | 2006-06-08 |
Construction of eukaryotic cell lines expressing the site-specific recombinase Cre and application in recombination of Pseudorabies virus |
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| SU Xin-ming,XU Ya-lin,YU Chun-mei,CAO Rui-bing,ZHOU-Bin,CHEN Pu-yan.Construction of eukaryotic cell lines expressing the site-specific recombinase Cre and application in recombination of Pseudorabies virus[J].Journal of Nanjing Agricultural University,2007,30(4):114-119. |
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| Authors: | SU Xin-ming XU Ya-lin YU Chun-mei CAO Rui-bing ZHOU-Bin CHEN Pu-yan |
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| Institution: | 1. Key Laboratory of Animal Diseases Diagnostic and Immunology, Ministry of Agriculture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. Department of Microbiology and Immunology, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pseudorabies virus PCR Cre recombinase eukaryotic cell lines loxP |
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