| 靶向加工番茄elF4E1的CRISPR/Cas9载体有效性验证 |
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| 引用本文： | 付紫梅,袁伦,邵冬南,郝小军,崔百明,向本春.靶向加工番茄elF4E1的CRISPR/Cas9载体有效性验证[J].新疆农业科学,2018(2). |
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| 作者姓名： | 付紫梅 袁伦 邵冬南 郝小军 崔百明 向本春 |
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| 作者单位： | 石河子大学生命科学学院/石河子大学农业生物技术重点实验室;威斯腾生物医药科技有限责任公司;新疆绿洲农业病虫害治理与植保资源利用自治区普通高校重点实验室/石河子大学农学院; |
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| 摘 要： | 【目的】验证基于CRISPR/Cas9系统构建的靶向编辑加工番茄(Solanum lycopersicum)e IF4E1基因载体的有效性,为CRISPR/Cas9系统在培育PVY抗性植株中的应用提供技术支持。【方法】构建靶向编辑番茄真核翻译起始因子el F4E1基因的CRISPR/Cas9系统表达载体,用农杆菌渗透法瞬时转化番茄植株,PCR扩增已转化植株靶位点周围DNA序列后用HaeⅢ进行酶切,回收未切开的条带与p GEM-T载体连接后进行单克隆测序。【结果】对测得的9个克隆序列进行比对分析,在PAM(protospacer adjacent motifs)上游的6~8 bp的碱基处均发生突变,并且都为单碱基的替换,导致多肽链中单个氨基酸的替换。【结论】利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统构建的载体能够特异性地靶向加工番茄e IF4E1基因,为利用CRISPR/Cas9系统敲除e IF4E1基因,获得抗PVY病毒的番茄育种材料奠定了基础。
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| 关 键 词： | 加工番茄 PVY elF4E1 CRISPR/Cas9 瞬时转化 |
Verification of the Effectiveness of CRISPR/Cas9 Vectors Targeting to Processing Tomato eIF4E1 |
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