| 低纤维素酶背景里氏木霉菌株的构建和应用 |
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| 引用本文： | 刘杜娟,黄火清,苏小运.低纤维素酶背景里氏木霉菌株的构建和应用[J].中国农业科技导报,2020,22(12):50-57. |
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| 作者姓名： | 刘杜娟 黄火清 苏小运 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院饲料研究所, 农业农村部饲料生物技术重点开放实验室, 北京 100081 |
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| 基金项目： | 中国农业科学院基本科研业务费项目（Y2019XK03） |
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| 摘 要： | 丝状真菌里氏木霉（Trichoderma reesei）产生的纤维素酶主要包括纤维二糖水解酶和内切葡聚糖酶。在使用里氏木霉表达外源基因时，它们会形成较高的纤维素酶背景，而且其表达还可能会导致对细胞转录、翻译和分泌等相关资源的占用。应用CRISPR/Cas9技术，在体外组装Cas9/gRNA复合物并转化里氏木霉以定点敲除主要的纤维二糖水解酶cbh1基因，同时结合RNAi干扰技术来沉默主要的内切葡聚糖酶eg2基因，以期一步构建里氏木霉低纤维素酶背景的表达系统。获得了一株纤维素酶表达显著下降的11号转化子SUS6。该转化子中，cbh1的表达完全消失，而eg2基因的表达水平较出发菌株SUS5降低了98%。以该转化子为宿主表达外源基因NfBgl3A，两个代表性转化子的β-葡萄糖苷酶酶活最高分别为172.4和79.3 U·mL-1，远高于以出发菌株（高纤维素酶背景）为宿主表达β-葡萄糖苷酶酶活（两个代表转化子分别为11.6和31.9 U·mL-1）。因此，构建低纤维素酶背景的菌株作为表达宿主，还可明显的提高某些异源基因的表达水平。
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| 关 键 词： | 里氏木霉 CRISPR/Cas9 RNAi 纤维素酶 CBH1 EG2 |
| 收稿时间： | 2019-07-29 |
Construction of a Trichoderma reesei Strain with Low Cellulase Background and Its Application |
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| LIU Dujuan,HUANG Huoqing,SU Xiaoyun.Construction of a Trichoderma reesei Strain with Low Cellulase Background and Its Application[J].Journal of Agricultural Science and Technology,2020,22(12):50-57. |
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| Authors: | LIU Dujuan HUANG Huoqing SU Xiaoyun |
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| Institution: | Key Laboratory for Feed Biotechnology, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Trichoderma reesei CRISPR/Cas9 RNAi cellulase CBH1 EG2 |
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