| PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究 |
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| 引用本文： | 刘国阳,华 涛,乔绪稳,等.PPV-VP2蛋白和PCV2-Cap蛋白二联亚单位疫苗的研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2018,46(9):18-26. |
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| 作者姓名： | 刘国阳 华 涛 乔绪稳 等 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学动物科技学院;江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 公益性(农业)行业科研专项(201303046）；江苏省农业科技自主创新项目［CX(15)1059］ |
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| 摘 要： | 【目的】研制PCV2ORF2基因编码的Cap蛋白与PPV VP2结构蛋白二联亚单位疫苗。【方法】设计截去NLS信号肽序列的Cap蛋白氨基酸序列和VP2蛋白氨基酸全序列,分别进行大肠杆菌偏嗜密码子优化,构建重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统表达出可溶性的Cap蛋白和VP2重组蛋白。将重组蛋白纯化后分别与ISA201佐剂混合制备单苗和二联亚单位疫苗,免疫ICR小鼠,同时设立PBS空白对照和大肠杆菌BL21对照。首免后21d进行加强免疫,利用MTT比色法、细胞中和试验法和ELISA法对免疫小鼠淋巴细胞的转化功能及细胞因子(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α)mRNA水平、免疫后中和抗体效价以及ELISA抗体水平进行检测。小鼠二免21d后进行PPV和PCV2混合攻毒,利用Real-time PCR法定量测定攻毒后小鼠脾脏的病毒含量。【结果】成功构建了重组质粒pET32a-Cap和pET32a-VP2,表达出可溶性蛋白Cap和VP2,经GEM颗粒和饱和硫酸铵沉淀法纯化蛋白,获得的PCV2Cap蛋白质量浓度为1 213μg/mL,PPV VP2蛋白质量浓度为1 025μg/mL。两种蛋白混合乳化制苗后无相互免疫抑制作用,并且能够诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。免疫后42d,单苗免疫组和二联亚单位疫苗组PCV2ELISA抗体效价均能达到800以上,中和抗体达到32~38,PPV HI抗体效价均高于6,PPV中和效价高于300,并且诱导机体产生强烈的淋巴细胞增殖反应,提高IL-4和IFN-γ的mRNA表达水平。攻毒试验结果显示,免疫组小鼠脾脏中PCV2和PPV含量显著低于对照组,免疫组组间无显著性差异。【结论】利用大肠杆菌表达的PCV2Cap蛋白和PPV VP2蛋白制备的二联亚单位疫苗免疫ICR小鼠,其抗体水平与Cap、VP2单苗免疫水平相当,且对ICR小鼠有较好的免疫保护作用。
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| 关 键 词： | Cap蛋白 VP2蛋白 可溶性表达 二联亚单位疫苗 猪细小病毒 猪圆环病毒 |
| 收稿时间： | 2017/6/2 0:00:00 |
Duplex subunit vaccine combined with PPV VP2 and PCV2 Cap proteins |
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| LIU Guoyang,HUA Tao and QIAO Xuwen,et al.Duplex subunit vaccine combined with PPV VP2 and PCV2 Cap proteins[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2018,46(9):18-26. |
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| Authors: | LIU Guoyang HUA Tao and QIAO Xuwen |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cap protein VP2 protein soluble expression duplex subunit vaccine porcine parvovirus (PPV) porcine circovirus (PCV) |
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