| 基于A型塞内卡病毒VP3蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 申水莹,闫若潜,雷从从,等.基于A型塞内卡病毒VP3蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2021,49(2):23-30. |
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| 作者姓名： | 申水莹 闫若潜 雷从从 等 |
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| 作者单位： | 河南农业大学 牧医工程学院;河南省动物疫病预防控制中心;西北农林科技大学 动物医学院 |
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| 基金项目： | 2019年度河南省科技创新领军人才计划项目（204200510012）；动物基因工程疫苗国家重点实验室开放课题“猪塞尼卡病毒病灭活疫苗研究”（SKLGEVV-ZD/ZY-2019） |
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| 摘 要： | 【目的】建立基于VP3蛋白检测血清中A型塞内卡病毒(SVA)抗体的间接ELISA方法，为临床上猪群SVA感染及未来疫苗免疫效果评价提供有效手段。【方法】克隆SVA的VP3基因，将其与pQE 30表达载体连接，并进行原核表达，对表达的蛋白进行纯化和鉴定。用纯化的重组VP3蛋白（rVP3）作为包被抗原，通过矩阵法优化ELISA反应条件，建立检测SVA抗体的间接ELISA方法，通过对已知背景的200份SVA阴阳性血清进行检测以确定临界值，并对该方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性进行验证。将采自SVA灭活疫苗免疫猪不同时期的160份血清，分别用该试验建立的方法及本课题组前期建立的基于VP1蛋白的间接ELISA方法进行检测，对比两者检测结果。【结果】成功克隆717 bp的VP3基因，表达出分子质量约为32 ku的VP3重组蛋白（rVP3）。Western Blot试验结果表明，纯化的 rVP3 蛋白具有良好的反应原性。建立了基于VP3蛋白的SVA间接ELISA检测方法，当样本OD450(S)/阳性对照OD450（P）＞0.138时判定为SVA抗体阳性。该方法特异性强，与FMDV(O/A型)、PRV、PRRSV、CSFV病原阳性血清均无交叉反应；敏感性较好，检测出的阳性血清最高稀释倍数与中和试验基本一致；重复性和稳定性好，批内变异系数小于4%，批间变异系数小于9%。160份血清检测结果表明，两种方法在不同时期的抗体阳性检出率略有差异。【结论】建立了基于VP3蛋白的SVA间接ELISA检测方法，该方法具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。
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| 关 键 词： | A型塞内卡病毒 VP3蛋白 间接ELISA 病毒检测 |
| 收稿时间： | 2020/1/12 0:00:00 |
Establishment of indirect ELISA for detecting antibody based on VP3 protein of senecavirus A |
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| SHEN Shuiying,YAN Ruoqian,LEI Congcong,et al.Establishment of indirect ELISA for detecting antibody based on VP3 protein of senecavirus A[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2021,49(2):23-30. |
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| Authors: | SHEN Shuiying YAN Ruoqian LEI Congcong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | senecavirus A VP3 protein indirect ELISA virus detecting |
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