| 含E.coli F因子的马立克氏病病毒1型（MDVI）转移载体的构建及初步应用 |
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| 引用本文： | 邱亚峰,葛菲菲,陈溥言.含E.coli F因子的马立克氏病病毒1型（MDVI）转移载体的构建及初步应用[J].中国农业科学,2006,39(11):2341-2346. |
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| 作者姓名： | 邱亚峰 葛菲菲 陈溥言 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院动物疫病诊断与免疫重点实验室,南京210095 |
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| 基金项目： | 国家863高新技术发展项目（2002AA245051） |
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| 摘 要： | 【目的】为了构建MDVI细菌人工染色体，以便快速有效地进行重组病毒的筛选，进行了含EcoliF因子的马立克氏病病毒I型（MDVI）转移载体的构建。【方法】利用DNA重组技术，构建了含有EcoliF因子的马立克氏病病毒I型（MDVI）转移载体，利用脂质体，将线性化的转移载体转染入已感染CVI988病毒的CEF，用Mx—HAT药物筛选3代以后，用x—gal染色，挑取阳性克隆。【结果】经测序分析发现，人工体外合成的单一loxP位点，序列正确，另外，同源重组左臂和右臂序列正确，并且相对连接。利用SphI和NheI双酶切，鉴定出含有同向LoxP位点的转移载体，将其命名为pUS—BGS。将该载体用NheI线性化后，用脂质体转染已感染cVI988病毒的CEF，用MX—HAT药物筛选3代以后，x—gaI染色，可以观察到呈现蓝色的重组病毒。【结论】本研究报道了含有Ecol／F因子以及两同向的loxP位点的MDVI转移载体的构建，利用该载体可以有效地进行重组病毒的筛选，为下一步MDVI细菌人工染色体的构建奠定了基础。
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| 关 键 词： | 马立克氏病病毒 细菌人工染色体 F因子 |
| 收稿时间： | 2005-07-03 |
| 修稿时间： | 2005-07-032006-05-12 |
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